[發明專利]利用紅和遠紅熒光染料在細胞級表征生物組織

在審

• 申請號: 201380025844.5
• 申請日: 2013-05-17
• 公開（公告）號: CN104350376A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 繆麗爾·阿巴西;奧迪勒·卡西拉吉;科琳娜·拉普拉斯-比埃
• 申請（專利權）人: 古斯塔夫·魯西IGR研究所;冒納凱阿技術公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京金思港知識產權代理有限公司 11349
• 代理人: 邵毓琴;李晶

背景技術

口腔癌(包括嘴唇、舌部、咽喉和口腔)在所有的癌癥形式中排列第12位。盡管原發惡性腫瘤當前在治療上有所進展，但由于其確診時通常已是晚期，因而仍然是一種預后不佳的癌癥。白光檢查和觸診通常用于定位活體檢視部位。在進行了放射性膠體和藍色染料的間質注射后，術中淋巴造影已被確認和廣泛接受為常規的手術程序，其主要用于乳腺癌、皮膚黑色素瘤以及較小范圍的頭頸癌。

已引入光學診斷方法來改善對癌癥前期及癌性損害與正常組織之間的鑒別，以及用來檢測前哨淋巴結(Rasmussen?J.C.et?al.,Lymphatic?imaging?in?humans?with?near-infrared?fluorescence,Curr?Opin?Biotechno?2009；20:74-822009，以及Varghese?P.et?al.,Methylene?Blue?Dye-A?Safe?and?Effective?Alternative?for?Sentinel?Lymph?Node?Localization,The?Breast?J?2008；14:61-7)。已利用來自內源性和外源性誘導熒光團的宏觀(或稱可目視)熒光成像，或利用諸如喇曼光譜學、熒光光譜學和彈性散射光譜學等的分光鏡分析法進行臨床研究。共焦顯微術長時間局限于基礎研究，但是近年來已用于可疑組織細胞級的體內成像(Kiesslich?R.et?al.,Confocal?laser?endoscopy?for?diagnosing?intraepithelial?neoplasias?and?colorectal?cancer?in?vivo,Gastroenterology2004；127:706-13)。為了滿足對高分辨率成像的需要，過去幾年已廣泛使用基于探頭的共焦激光顯微內鏡(pCLE)。這樣的非侵入式方案被稱為“光學活體檢視”，其使得利用熒光染料來評定和監視各種器官中的癌癥及其他疾病成為可能。

金絲桃素，一種羥基化二苯基二萘嵌苯喹啉(phenantroperylenequinone)，已被考慮用來進行熒光診斷。已評價了這種染料在異常細胞特別是癌性細胞中較高的上染率對于提高膀胱癌檢出率(D'Hallewin?M-A.et?al.,Hypericin-based?fluorescence?diagnosis?of?bladder?carcinoma,BJU?International?2002；89:760-3)和惡性口腔損害檢出率(Thong?P.S.P.et?al.,Clinical?application?of?fluorescence?endoscopic?imaging?using?hypericin?for?the?diagnosis?of?human?oral?cavity?lesions,Br?J?Cancer?2009；101:1580-4)的可能性。在后來的研究中，診斷標準是基于紅藍強度比，在非惡性損害中的紅藍強度比大于惡性損害中的紅藍強度比。

甲苯胺藍，一種來自噻嗪族的公知異染性染料，現已研究了其在口腔寬場檢查中的可能性，通過某種局部施用對惡性和惡變前的損害進行染色：根據愛潑斯坦(Epstein)所述，利用這種處理方法，具有較高風險發展成癌癥的惡變前損害會被優先著色。利用這種活體染料進行宏觀檢查時，主要的假陽性結果通常與炎癥或創傷區域有關。因此，為了消除這些因素，強烈推薦在兩星期后進行復查(Epstein?J.B.et?al.,2009)。一種現有的元分析法被用來評價甲苯胺藍在口腔癌篩查中的有效性。結果表明，在高風險人群中，該方案的靈敏度范圍在93.5％至97.5％之間，特異性范圍在73.3％至92.9％之間。

為了突出用接觸式內鏡檢查術進行檢查的細胞結構，已考慮用亞甲基藍(一種與甲苯胺藍密切相關的噻嗪染料)對口部和喉部上皮的表面層進行染色。可對核質比例以及細胞核顏色、大小和形狀進行原位分析，然而盡管其具有作為診斷工具的潛在價值，但是近年來幾乎沒有什么研究描述這種技術的應用。