[發明專利]表達PH敏感性免疫球蛋白序列的非人動物

有效

• 申請號: 201380025818.2
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN104302171B
• 公開（公告）日: 2017-05-03
• 發明（設計）人: J·麥克沃克;L·麥克唐納;J·H·馬丁;A·J·莫菲
• 申請（專利權）人: 瑞澤恩制藥公司
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;C07K16/00;C12N15/85
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙)11400
• 代理人: 鄔玥,葛強

1.一種制備基因修飾的非人動物的方法，所述方法包括修飾所述非人動物使其在其種系中包括第一免疫球蛋白可變基因座，所述第一免疫球蛋白可變基因座包括未經重排的免疫球蛋白重鏈可變區核酸序列，所述未經重排的免疫球蛋白重鏈可變區核酸序列包括插入至少一個組氨酸密碼子或用組氨酸密碼子取代至少一個非組氨酸密碼子，其中所述插入或取代的組氨酸密碼子不由相應的野生型種系的未經重排的免疫球蛋白可變區核酸序列編碼。

2.根據權利要求1所述的方法，進一步包括修飾所述非人動物使其在其種系中包括第二免疫球蛋白可變基因座，所述第二免疫球蛋白可變基因座包括免疫球蛋白輕鏈可變區核酸序列，所述免疫球蛋白輕鏈可變區核酸序列包括插入至少一個組氨酸密碼子或用組氨酸密碼子取代至少一個非組氨酸密碼子，其中所述插入或取代的組氨酸密碼子不由相應的野生型種系的免疫球蛋白可變區核酸序列編碼。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述第一免疫球蛋白可變基因座包括未經重排的重鏈可變區核酸序列的功能性部分，所述未經重排的重鏈可變區核酸序列的功能性部分包括未經重排的V_H、D_H和J_H基因區段和所述插入或取代的組氨酸。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述未經重排的V_H、D_H和J_H基因區段是未經重排的人源V_H、未經重排的人源D_H和未經重排的人源J_H基因區段。

5.根據權利要求3所述的方法，其中所述未經重排的V_H、D_H和J_H基因區段是至少一個未經重排的人源V_H基因區段、包含接頭的合成的D區段和人源J_H基因區段。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述合成的D區段包括至少一個組氨酸密碼子。

7.根據權利要求2所述的方法，其中所述第二免疫球蛋白可變基因座包括未經重排的輕鏈可變區核酸序列的功能性部分，所述未經重排的輕鏈可變區核酸序列的功能性部分包括未經重排的V_L和未經重排的J_L基因區段和所述插入或取代的組氨酸。

8.根據權利要求2所述的方法，其中所述第二免疫球蛋白可變基因座包括重排的免疫球蛋白輕鏈可變區核酸序列，所述重排的免疫球蛋白輕鏈可變區核酸序列包括與J_L基因區段重排的V_L基因區段和所述插入或取代的組氨酸。

9.根據權利要求1所述的方法，其中所述插入或取代的組氨酸密碼子是在編碼可變結構域的核酸序列中并且所述組氨酸密碼子在選自下述的區域中：免疫球蛋白鏈的N-末端區、免疫球蛋白鏈的環4區、重鏈的CDR1、重鏈的CDR2、重鏈的CDR3、輕鏈的CDR1、輕鏈的CDR2、輕鏈的CDR3及以上區域的組合。

10.根據權利要求2所述的方法，其中所述第一免疫球蛋白可變基因座或第二免疫球蛋白可變基因座中的至少一個可操作地與在內源性非人源免疫球蛋白基因座的內源性非人源恒定區核酸序列連接。

11.根據權利要求4所述的方法，其中所述未經重排的人源V_H、未經重排的人源D_H和未經重排的人源J_H基因區段可操作地與內源性非人源免疫球蛋白重鏈恒定區核酸序列連接。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述內源性非人源免疫球蛋白重鏈恒定區核酸序列在內源性非人源免疫球蛋白基因座中。

13.根據權利要求7所述的方法，其中所述未經重排的V_L和未經重排的J_L基因區段可操作地與內源性非人源免疫球蛋白輕鏈恒定區序列連接。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述內源性非人源免疫球蛋白輕鏈恒定區序列在內源性非人源免疫球蛋白基因座。

15.根據權利要求1所述的方法，其中所述可變區核酸序列包含2、3、4或5個組氨酸的簇，所述組氨酸的簇為組氨酸密碼子對非組氨酸密碼子的取代和/或組氨酸密碼子的插入。