[發(fā)明專利]用于生產(chǎn)具有適于血管內(nèi)給藥的尺寸的干細(xì)胞的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380025722.6
• 申請(qǐng)日: 2013-04-17
• 公開（公告）號(hào): CN104520423B
• 公開（公告）日: 2017-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅廷燦;姜成根;申一燮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: K-干細(xì)胞有限公司;羅廷燦
• 主分類號(hào): C12N5/074
• 分類號(hào): C12N5/074;C12N5/02;C12N5/0775
• 代理公司: 北京律誠(chéng)同業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11006
• 代理人: 徐金國(guó)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于制備具有適用于血管內(nèi)給藥的尺寸的干細(xì)胞的方法，具體地涉及一種用于制備適合于血管內(nèi)給藥的、具有1-16μm的直徑的干細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

干細(xì)胞是指不僅具有自我復(fù)制能力，還具有分化為至少兩種類型的細(xì)胞的能力的細(xì)胞，并且可分為全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞和專能干細(xì)胞。全能干細(xì)胞是具有能夠發(fā)育成一個(gè)完整個(gè)體的全能性質(zhì)的細(xì)胞，而這些性質(zhì)為卵母細(xì)胞和精子受精之后直到八細(xì)胞期的細(xì)胞所擁有。當(dāng)這些細(xì)胞被分離并移植到子宮內(nèi)時(shí)，就可以發(fā)育成一個(gè)完整的個(gè)體。多能干細(xì)胞是能夠發(fā)育成外胚層、中胚層和內(nèi)胚層來(lái)源的各種細(xì)胞和組織的細(xì)胞，它們來(lái)源于受精后4-5天生成的胚囊內(nèi)部的內(nèi)細(xì)胞群。這些細(xì)胞被稱為“胚胎干細(xì)胞”，并能分化成各種其他的組織細(xì)胞，但不會(huì)形成新的活的生物體。專能干細(xì)胞是僅能夠分化成含有這些細(xì)胞的組織和器官特異的細(xì)胞的干細(xì)胞，它們不僅參與胎兒，新生兒和成人期的各種組織和器官的生長(zhǎng)和發(fā)育，而且也參與維持成年組織的動(dòng)態(tài)平衡，和組織損傷時(shí)的誘導(dǎo)再生功能。組織特異性的專能細(xì)胞統(tǒng)稱為“成體干細(xì)胞”。

成體干細(xì)胞是通過(guò)從各種人的器官中提取細(xì)胞并使該細(xì)胞發(fā)育為干細(xì)胞而獲得的，并且其特征在于它們僅分化成特定的組織。然而，近來(lái)，用于將成體干細(xì)胞分化成各種組織(包括肝細(xì)胞)的實(shí)驗(yàn)取得了顯著的成功，這引起了關(guān)注。特別是，已在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中努力通過(guò)使用細(xì)胞進(jìn)行生物組織和器官的再生，以及恢復(fù)因疾病或事故等喪失的功能。在這一領(lǐng)域中經(jīng)常用于再生醫(yī)學(xué)的方法包括以下步驟：從患者采集干細(xì)胞、血液源性的單核細(xì)胞或骨髓源性的單核細(xì)胞；通過(guò)試管培養(yǎng)誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖和/分化；并通過(guò)移植將所選擇的未分化(干細(xì)胞和/或祖細(xì)胞)和/或分化的細(xì)胞導(dǎo)入到患者的身體中。因此，預(yù)期現(xiàn)有的由藥物或手術(shù)治療疾病的經(jīng)典方法將被用健康的細(xì)胞、組織或器官替換受損細(xì)胞、組織或器官的細(xì)胞/組織替代療法所替代，因此干細(xì)胞的利用將進(jìn)一步增加。

因此，目前正在研究干細(xì)胞的各項(xiàng)功能。特別是，由于使用間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞治療技術(shù)開始受到人們的關(guān)注，已經(jīng)開發(fā)了用于改善間充質(zhì)干細(xì)胞以使其適合于治療目的的技術(shù)(WO2006/019357，韓國(guó)專利號(hào)0795708以及韓國(guó)專利號(hào)0818214)。

然而，與用于制備適合于血管內(nèi)給藥的干細(xì)胞的方法相關(guān)的技術(shù)尚未得到充分研究。

因此，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)將干細(xì)胞在含有基礎(chǔ)培養(yǎng)基和選自N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)、胰島素或胰島素樣因子、氫化可的松、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)和抗氧化劑的組中的至少兩種組分的培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，可以制備具有適合于細(xì)胞內(nèi)給藥的尺寸的干細(xì)胞，從而完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于制備具有適用于血管內(nèi)給藥的尺寸的干細(xì)胞的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種用于制備具有適用于血管內(nèi)給藥的尺寸的干細(xì)胞的培養(yǎng)基組合物。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種制備具有適合于血管內(nèi)給藥的尺寸干細(xì)胞的方法，該方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)干細(xì)胞的步驟，所述培養(yǎng)基包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基；和選自N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)、胰島素或胰島素樣因子、氫化可的松、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)和抗氧化劑的組中的至少兩種組分。

本發(fā)明還提供了一種用于制備具有適用于血管內(nèi)給藥的尺寸的干細(xì)胞的培養(yǎng)基組合物，所述培養(yǎng)基組合物含有基礎(chǔ)培養(yǎng)基；和選自N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)、胰島素或胰島素樣因子、氫化可的松、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)和抗氧化劑的組中的至少兩種組分。

附圖說(shuō)明

圖1是示出根據(jù)培養(yǎng)基和傳代數(shù)，脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞的尺寸的圖表。

圖2是示出根據(jù)培養(yǎng)基，脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)記物表達(dá)的圖表。

具體實(shí)施方式

除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所述領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的普遍理解相同的含義。通常，本文中使用的命名法和實(shí)驗(yàn)方法是本領(lǐng)域公知并且通常采用的。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“干細(xì)胞”指不僅具有自我復(fù)制的能力，還具有能夠分化為至少兩種類型的細(xì)胞的能力的細(xì)胞。“成體干細(xì)胞”是指出現(xiàn)在發(fā)育過(guò)程后形成胚胎的各個(gè)器官的階段，或出現(xiàn)在成體階段的干細(xì)胞。