[發明專利]用于蛋白質表達的重組細菌宿主細胞

在審

• 申請號: 201380025191.0
• 申請日: 2013-05-13
• 公開（公告）號: CN104487454A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: P·J·巴塞特;D·P·哈姆費雷斯;P·M·帕特爾
• 申請（專利權）人: UCB醫藥有限公司
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;C12N15/70
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李程達

1.一種重組革蘭陰性細菌細胞，其包含：

a.編碼在選自D133、H145、H157、N31、R62、I70、Q73、C94、S95、V98、Q99、R100、L108、Y115、V135、L136、G140、R144和G147的一個或多個氨基酸上具有突變的spr蛋白的突變spr基因和

b.能夠表達或過表達一種或多種能夠促進蛋白質折疊的蛋白例如FkpA、Skp、SurA、PPiA和PPiD的基因

其中所述細胞相較于野生型細胞具有降低的Tsp蛋白活性。

2.權利要求1的細胞，其中所述突變spr基因編碼具有選自D133A、H145A、H157A、N31Y、R62C、I70T、Q73R、C94A、S95F、V98E、Q99P、R100G、L108S、Y115F、V135D、V135G、L136P、G140C、R144C和G147C的一個或多個突變的spr蛋白。

3.權利要求2的細胞，其中所述突變spr基因編碼具有選自S95F、V98E、Y115F、D133A、V135D、V135G和G147C的一個或多個突變的spr蛋白。

4.權利要求3的細胞，其中所述突變spr基因編碼具有突變C94和H145A例如C94的spr蛋白。

5.權利要求2的細胞，其中所述突變spr基因編碼具有選自D133A、H145A和H157A的突變的spr蛋白。

6.權利要求1的細胞，其中所述突變spr基因編碼具有選自C94A的突變的spr蛋白。

7.任何前述權利要求的細胞，其中將所述突變spr基因整合入細胞的基因組。

8.任何前述權利要求的細胞，其中將編碼能夠促進蛋白質折疊的蛋白的基因例如在質粒上瞬時轉染入細胞。

9.權利要求1至7的任一項的細胞，其中將編碼能夠促進蛋白質折疊的蛋白的基因整合進入細胞基因組。

10.任何前述權利要求的細胞，其中所述能夠促進蛋白質折疊的蛋白為FkpA、Skp或FkpA與Skp的組合，特別是FkpA。

11.任何前述權利要求的細胞，其中所述細胞還包含下列突變的基因的一個或多個：

a.編碼具有伴侶蛋白活性和降低的蛋白酶活性的DegP蛋白的突變的DegP基因；

b.突變的ptr基因，其中所述突變的ptr基因編碼具有降低的蛋白酶活性的蛋白酶III蛋白或為敲除突變的ptr基因；和

c.突變的OmpT基因，其中所述突變的OmpT基因編碼具有降低的蛋白酶活性的OmpT蛋白或為敲除突變的OmpT基因。

12.任何前述權利要求的細胞，其中所述細胞包含編碼具有降低的蛋白酶活性的Tsp蛋白的突變的Tsp基因，或為敲除突變的Tsp基因。

13.權利要求12的細胞，其中所述細胞的基因組，除突變的spr基因和突變的Tsp基因外，與野生型細菌細胞是同基因的。

14.任何前述權利要求的細胞，其中所述細胞不包含編碼DsbC的基因。

15.一種重組革蘭陰性細菌細胞，其相較于野生型細胞具有降低的Tsp蛋白活性，并且具有編碼能夠抑制包含突變的Tsp基因的細胞的表型的spr蛋白的突變spr基因，和適合用于表達能夠促進蛋白質折疊的蛋白的編碼FkpA、Skp或FkpA與Skp的組合，特別是FkpA的基因，其中除相較于野生型細胞降低Tsp蛋白活性所需的修飾和突變的spr基因外，所述細胞的基因組與野生型細菌細胞是同基因的。

16.權利要求15的細胞，其中所述突變spr基因編碼具有選自N31Y、R62C、I70T、Q73R、C94A、S95F、V98E、Q99P、R100G、L108S、Y115F、D133A、V135D、V135G、L136P、G140C、R144C、H145A、G147C、H157A和W174R的一個或多個突變的spr蛋白。

17.權利要求15的細胞，其中所述突變spr基因編碼具有一個或多個權利要求1至6的任一項中定義的突變的spr蛋白。