[發明專利]使用合成的信使RNA無飼養細胞地衍生人類誘導性多能干細胞

有效

• 申請號: 201380025010.4
• 申請日: 2013-05-13
• 公開（公告）號: CN104520424B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 王繼武;魯吉·瓦蘭;倪毓輝
• 申請（專利權）人: 美國綠陽生物技術及醫藥公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10
• 代理公司: 北京律盟知識產權代理有限責任公司 11287
• 代理人: 林斯凱

1.一種用于去分化或重編程無飼養細胞、無外來物且無整合的哺乳動物體細胞的方法，所述方法包括：

a)用補充有以下組合物的培養基轉染分離的哺乳動物體細胞，所述組合物包含：1)有效量的編碼M₃O的合成的mRNA，以及2)編碼Sox2、Klf4、Nanog、Lin28和cMyc-T58A的合成的mRNA；并且

b)在無飼養細胞和無外來物的培養條件下培養所述體細胞足夠長的時間，并且每天重復步驟a)一次直到將所述體細胞重編程或去分化，產生無飼養細胞、無外來物且無整合的誘導的多能干細胞。

2.一種用于去分化或重編程無飼養細胞、無外來物且無整合的哺乳動物體細胞的方法，所述方法包括：

a.在培養基中將所述哺乳動物體細胞以一細胞密度鋪板，所述細胞密度等同于標準6孔組織培養板的每個孔50,000至150,000個細胞，并在無飼養細胞、無外來物且無整合的條件下培養；

b.在鋪板后一天，通過將步驟a的培養基換成新鮮培養基來轉染細胞，所述新鮮培養基補充有包含以下的組合物：1)有效量的編碼M₃O的合成的mRNA，以及2)編碼Sox2、Klf4、Nanog、Lin28和cMyc-T58A的合成的mRNA，并且在無飼養細胞和無外來物的培養條件下培養所述分離的哺乳動物體細胞；

c.重復步驟b足夠多的次數，由此將所述體細胞重編程或去分化，產生無飼養細胞、無外來物且無整合的誘導的多能干細胞。

3.權利要求2的方法，其中所述哺乳動物體細胞是人類細胞。

4.一種用于去分化或重編程無飼養細胞、無外來物且無整合的哺乳動物體細胞的方法，所述方法包括：

a.在無飼養細胞和無外來物的培養條件下在培養基中培養分離的哺乳動物體細胞，所述培養基補充有包含以下的組合物：1)有效量的編碼M₃O的合成的mRNA，以及2)編碼Sox2、Klf4、Nanog、Lin28和cMyc-T58A的合成的mRNA；

b.在24小時后將步驟a的培養基換成新鮮培養基，所述新鮮培養基補充有所述組合物，并且在無飼養細胞和無外來物的培養條件下培養所述分離的哺乳動物體細胞；

c.重復步驟b足夠多的次數，由此將所述體細胞重編程或去分化，產生無飼養細胞、無外來物且無整合的誘導的多能干細胞。

5.一種制備藥劑的方法，所述藥劑用于在患者中治療或抑制疾病或障礙的一種或多種癥狀，所述方法包括：

使用權利要求1、2或4的方法以獲得所述誘導的多能干細胞；以及

使用所獲得的誘導的多能干細胞制備藥劑。