[發(fā)明專利]毒肽產(chǎn)生、植物中的肽表達(dá)和富含半胱氨酸的肽的組合

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380024489.X
• 申請(qǐng)日: 2013-03-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104411714A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R.M.肯尼迪;W.特德福德;C.亨德里克森;R.維納布爾;C.富涅;J.麥金泰爾;A.卡爾森;鮑林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 韋斯塔隆公司
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C12N15/82;A01N63/02
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;林森

1.一種包含與富含半胱氨酸的殺蟲(chóng)蛋白(CRIP)例如抑制物半胱氨酸結(jié)(ICK)基序蛋白有效連接的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號(hào)肽(ERSP)的蛋白質(zhì)，其中所述ERSP是所述蛋白質(zhì)(ERSP-ICK)的N端。

2.權(quán)利要求1的肽，其中所述ERSP是將表達(dá)的CRIP導(dǎo)向植物細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的任何信號(hào)肽。

3.權(quán)利要求2的肽，其中所述CRIP是抑制物半胱氨酸結(jié)(ICK)蛋白。

4.權(quán)利要求2的肽，其中所述CRIP是非ICK蛋白。

5.權(quán)利要求2的肽，其中所述ERSP是來(lái)源于植物的長(zhǎng)度為5-50個(gè)氨基酸的肽。

6.一種與翻譯穩(wěn)定性蛋白(STA)有效連接的權(quán)利要求1的肽，其中所述ERSP是所述蛋白質(zhì)的N端，翻譯穩(wěn)定性蛋白(STA)可在任選為ICK基序蛋白(ERSP-STA-ICK)或非ICK基序蛋白(ERSP-STA-非ICK)的CRIP的N端一側(cè)；或者在ICK或非ICK基序蛋白(ERSP-ICK-STA)或(ERSP-非ICK-STA)的C端一側(cè)。

7.一種具有添加至已知肽并與所述已知肽有效連接的N端二肽的肽，其中所述N端二肽由二肽N端的一個(gè)非極性氨基酸和二肽C端的一個(gè)極性氨基酸組成，其中所述肽選自CRIP?(富含半胱氨酸的殺蟲(chóng)肽)，例如選自ICK肽或非ICK肽。

8.一種具有添加至已知肽并與所述已知肽有效連接的N端二肽的權(quán)利要求7的肽，其中所述N端二肽由二肽N端的一個(gè)非極性氨基酸和二肽C端的一個(gè)極性氨基酸組成。

9.權(quán)利要求8的肽，其中所述來(lái)自N端二肽的N端氨基酸的非極性氨基酸選自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸和甲硫氨酸。

10.權(quán)利要求8的肽，所述N端肽的C端氨基酸的極性氨基酸選自絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、組氨酸、色氨酸、酪氨酸。

11.權(quán)利要求8的肽，其中所述來(lái)自N端二肽的N端氨基酸的非極性氨基酸選自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸和甲硫氨酸，所述N端肽的C端氨基酸的極性氨基酸選自絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、組氨酸、色氨酸、酪氨酸。

12.權(quán)利要求11的肽，其中所述二肽由甘氨酸-絲氨酸組成。

13.一種包含至少兩種類型的殺蟲(chóng)蛋白或肽的組合物，其中一種類型是成孔殺蟲(chóng)蛋白(PFIP)，另一種類型是富含半胱氨酸的殺蟲(chóng)肽(CRIP)。

14.權(quán)利要求13的組合物，其中所述CRIP是ICK，任選所述ICK源自于或來(lái)源于Hadronyche?versuta或布魯山脈漏斗網(wǎng)蜘蛛、Atrax?robustus、Atrax?formidabilis、Atrax?infensus，包括稱為U-ACTX多肽、U-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b的毒素或突變體或變體。

15.權(quán)利要求14的組合物，其中所述CRIP是非ICK?CRIP，任選所述非ICK?CRIP源自于或來(lái)源于具有非ICK?CRIPS的動(dòng)物，例如海葵、海膽和海蛤蝓，任選包括名為Anemonia?viridi的海葵，任選包括名為Av2和Av3的肽，尤其類似于Av2和Av3的肽，包括序列表所列出的這類肽或突變體或變體。

16.一種使用權(quán)利要求13的組合物控制Bt抗性昆蟲(chóng)的方法，所述方法包括產(chǎn)生至少兩種類型的肽的組合物，其中一種類型的肽是成孔殺蟲(chóng)蛋白(PFIP)，另一種類型的肽是富含半胱氨酸的殺蟲(chóng)肽(CRIP)，且PFIP和CRIP蛋白選自權(quán)利要求1和本文描述的任何組合物和序列表提供的任何蛋白質(zhì)；然后將所述組合物施用于昆蟲(chóng)所在地。

17.一種包括保護(hù)植物免遭Bt抗性昆蟲(chóng)在內(nèi)的控制Bt抗性昆蟲(chóng)的權(quán)利要求16的方法，所述方法包括產(chǎn)生表達(dá)至少兩種正確折疊的肽的組合的植物，其中一種類型的肽是成孔殺蟲(chóng)蛋白(PFIP)，另一種類型的肽是富含半胱氨酸的殺蟲(chóng)肽(CRIP)，且PFIP和CRIP蛋白選自本文所述的任何組合物和選自序列表提供的任何蛋白質(zhì)。