[發(fā)明專利]具有條件活性的抗表皮生長因子受體抗體及其使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380024291.1
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN104379602B
• 公開（公告）日: 2017-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: G·衛(wèi);G·弗羅斯特;L·黃;H·M·謝潑德;D·E·沃恩
• 申請（專利權(quán)）人: 哈洛齊梅公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K16/30;G01N33/53;G01N33/574
• 代理公司: 永新專利商標(biāo)代理有限公司72002
• 代理人: 左路

1.修飾的抗-EGFR抗體，或者其抗原結(jié)合片段，其包含在未修飾的抗體的可變重鏈中在對應(yīng)于位置104的位置用天冬氨酸的置換(Y104D)，其中：

所述修飾的抗-EGFR抗體或其抗原結(jié)合片段包含可變重鏈(VH)和可變輕鏈(VL)或其部分，所述其部分足以與EGFR抗原結(jié)合，從而單獨(dú)所述VH或VH和VL這兩者是修飾的；

所述其部分足以形成抗原結(jié)合位點(diǎn)及含有所述Y104D氨基酸置換；

通過將抗體的VH鏈與SEQ ID NO:3所示的VH鏈比對來鑒定對應(yīng)的氨基酸位置；

所述修飾的抗-EGFR抗體，或者其抗原結(jié)合片段，特異性結(jié)合表皮生長因子受體(EGFR)或其可溶性片段，并且含有未修飾的抗體或其抗原結(jié)合片段中的多達(dá)1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11個(gè)氨基酸置換，包括Y104D；

所述未修飾的抗-EGFR抗體選自：

i)西妥昔單抗，其包含(a)SEQ ID NO:3所示的可變重鏈及SEQ ID NO:4或10所示的可變輕鏈，或(b)SEQ ID NO:1所示的重鏈及SEQ ID NO:2所示的輕鏈，或其抗原結(jié)合片段；

ii)抗體，其包含SEQ ID NO:8所示的重鏈及SEQ ID NO:9所示的輕鏈，或其抗原結(jié)合片段；和

iii)Fab片段，其包含SEQ ID NO:5所示的重鏈及SEQ ID NO:2所示的輕鏈，或其抗原結(jié)合片段；和

iv)i)、ii)或iii)的人源化形式；和

所述修飾的抗-EGFR抗體，或者其抗原結(jié)合片段，在腫瘤環(huán)境中具有條件活性，并且在腫瘤環(huán)境條件下和在非腫瘤環(huán)境條件下相比，呈現(xiàn)出與人表皮生長因子受體(EGFR)或者其可溶性片段的結(jié)合活性至少1.7的比率，其中：

腫瘤環(huán)境條件包括6.0-6.5的pH或者5mM-20mM的乳酸鹽濃度兩者或兩者之一，及10mg/mL-50mg/mL的蛋白質(zhì)濃度；和

非腫瘤環(huán)境條件包括7.0-7.8的pH或者0.5mM-5mM的乳酸鹽濃度兩者或兩者之一，及10mg/mL-50mg/mL的蛋白質(zhì)濃度。

2.權(quán)利要求1的修飾的抗-EGFR抗體或者其抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合活性的比率是至少2.0或至少3.0。

3.權(quán)利要求1的修飾的抗-EGFR抗體或其抗原結(jié)合片段，其中在包括pH6.0-6.5的腫瘤環(huán)境條件下與在包括7.4的pH的非腫瘤環(huán)境下相比，所述修飾的抗-EGFR抗體或其抗原結(jié)合片段呈現(xiàn)出所述結(jié)合活性比率。

4.權(quán)利要求1的修飾的抗-EGFR抗體或其抗原結(jié)合片段，其中在包括6.0-6.5的pH及10mM-20mM的乳酸鹽濃度的腫瘤環(huán)境條件下與在包括7.0-7.4的pH及0.5mM-2mM的乳酸鹽濃度的非腫瘤環(huán)境下相比，所述修飾的抗-EGFR抗體或其抗原結(jié)合片段呈現(xiàn)出所述結(jié)合活性比率。

5.權(quán)利要求1的修飾的抗-EGFR抗體或其抗原結(jié)合片段，其中在腫瘤環(huán)境條件下與在非腫瘤環(huán)境條件下的蛋白質(zhì)濃度是基本相同或者是相同的。

6.權(quán)利要求1的修飾的抗-EGFR抗體或其抗原結(jié)合片段，選自

i)抗體，其包含：

a)可變重鏈(VH)，其包含SEQ ID NO:495、1062、1112、1114-1117、1124-1126或1128-1130所示氨基酸序列；以及

b)可變輕鏈(VL)，其包含SEQ ID NO:4或10所示氨基酸序列；

ii)i)的抗體的抗原結(jié)合片段；和

iii)i)或ii)的人源化變體。