[發明專利]L-核酸的酶促合成

有效

• 申請號: 201380024198.0
• 申請日: 2013-05-16
• 公開（公告）號: CN104379748B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: A·佩什;R·大衛;F·雅羅什;M·雅恩茲;S·克魯斯曼
• 申請（專利權）人: 諾松制藥股份公司
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/10;C12N9/12;C07K1/02;C07K1/04;C12P19/34;C12P21/00
• 代理公司: 北京市鑄成律師事務所 11313
• 代理人: 郝文博

1.一種用于添加一個或多個L-核苷酸到第一L-核酸的3'端的方法，其中所述方法包括在具有聚合酶活性的聚合酶存在下使所述一個或多個L-核苷酸與所述第一L-核酸反應的步驟，其中所述聚合酶活性能夠添加一個或多個L-核苷酸到所述第一L-核酸的3'端，

其中所述聚合酶由氨基酸序列組成，所述氨基酸序列選自由以下組成的組：根據SEQID NO:1的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:2的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:3的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:4的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:15的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:16的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:17的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:18的氨基酸序列、根據SEQ IDNO:19的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:20的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:21的氨基酸序列和根據SEQ ID NO:22的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的氨基酸是D-氨基酸。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述聚合酶由氨基酸序列組成，所述氨基酸序列選自由以下組成的組：根據SEQ ID NO:15的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:16的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:17的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:18的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:19的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:20的氨基酸序列、根據SEQ ID NO:21的氨基酸序列和根據SEQID NO:22的氨基酸序列，并且其中所述聚合酶活性是熱穩定的聚合酶活性。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述反應步驟是在允許進行所述添加所述至少一個或多個L-核苷酸到所述第一L-核酸的條件下進行。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述添加所述至少一個或多個L-核苷酸到所述第一L-核酸是所述至少一個或多個L-核苷酸共價結合到所述第一L-核酸。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一L-核酸是由DNA、RNA、經修飾的DNA、經修飾的RNA或其組合組成的引物。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一L-核酸由L-核苷酸和任選的修飾組成。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一L-核酸由L-核苷酸組成。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述反應還包含第二L-核酸，其中使一分子的所述第一L-核酸與一分子的所述第二L-核酸雜交。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述聚合酶合成與所述第二L-核酸互補的第三L-核酸，其中所述第三L-核酸包含所述第一L-核酸和添加到所述第一L-核酸的3'端的L-核苷酸。

10.一種用于在L-核苷酸和聚合酶存在下擴增靶L-核酸的方法，其中聚合酶活性能夠擴增所述靶L-核酸，其中所述聚合酶由氨基酸序列組成，所述氨基酸序列選自根據以下氨基酸序列組成的組：選自SEQ ID NO:15的氨基酸序列、選自SEQ ID NO:16的氨基酸序列、選自SEQ ID NO:17的氨基酸序列、選自SEQ ID NO:18的氨基酸序列、選自SEQ ID NO:19的氨基酸序列、選自SEQ ID NO:20的氨基酸序列、選自SEQ ID NO:21的氨基酸序列和選自SEQID NO:22的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的氨基酸是D-氨基酸。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述聚合酶活性是熱穩定的聚合酶活性。

12.根據權利要求10所述的方法，其中所述反應步驟是在允許擴增所述靶L-核酸的條件下進行。

13.根據權利要求10所述的方法，其中所述方法使用至少一種引物，其中所述至少一種引物由L-核苷酸和任選的修飾組成。