[發明專利]膽固醇氧化酶的穩定化方法

有效

• 申請號: 201380021290.1
• 申請日: 2013-04-18
• 公開（公告）號: CN104245931B
• 公開（公告）日: 2017-06-09
• 發明（設計）人: 荒武知子;金城健太
• 申請（專利權）人: 協和梅迪克斯株式會社
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96;C12N9/04
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司11219
• 代理人: 于潔,王海川

技術領域

本發明涉及膽固醇氧化酶的穩定化方法、膽固醇氧化酶的保存方法及膽固醇氧化酶的穩定化組合物。

背景技術

膽固醇氧化酶是以膽固醇和氧分子作為底物的氧化還原酶。臨床檢查中，經常進行使用膽固醇氧化酶的膽固醇的測定。臨床檢查中使用通過比色法來測定樣本中的膽固醇的方法等，該比色法中，使膽固醇氧化酶作用于樣本中的膽固醇而生成過氧化氫，使生成的過氧化氫在過氧化物酶存在下與氧化顯色型色原體反應而生成色素，并測定生成的色素的吸光度。

膽固醇的測定中使用的膽固醇氧化酶是不穩定的，在含有膽固醇氧化酶的測定試劑的保存中失活，存在測定試劑的性能變差的問題。

針對該問題，已知如下方法：向含有膽固醇氧化酶的溶液中添加堿金屬的氯化物和/或堿土金屬的氯化物的膽固醇氧化酶的穩定化方法(參考專利文獻1)、通過與選自牛血清白蛋白、葡聚糖、聚乙二醇中的水溶性載體發生化學鍵合而使溶液狀態下的膽固醇氧化酶穩定化的方法(參考專利文獻2)、通過向含有膽固醇氧化酶的溶液中添加牛血清白蛋白和賴氨酸而使膽固醇氧化酶穩定化的方法(參考專利文獻3)、通過與蛋白質分解物共存而使干燥狀態的膽固醇氧化酶穩定化的方法(參考專利文獻4)等。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開昭52-143285號公報

專利文獻2：日本特開平6-062846號公報

專利文獻3：日本特開平8-187095號公報

專利文獻4：日本特開2005-114368號公報

發明內容

發明所要解決的問題

本發明的目的在于提供適于長期保存的膽固醇氧化酶的穩定化方法、膽固醇氧化酶的保存方法及膽固醇氧化酶的穩定化組合物。

用于解決問題的手段

本發明人為了解決該問題而反復進行了深入研究，結果發現了通過使α-酮酸或其鹽在水性介質中與膽固醇氧化酶共存而使膽固醇氧化酶保持穩定的見解，從而完成了本發明。即，本發明涉及下述[1]～[6]項。

[1]一種膽固醇氧化酶的穩定化方法，其特征在于，使α-酮酸或其鹽在水性介質中與膽固醇氧化酶共存。

[2]如[1]所述的穩定化方法，其中，α-酮酸為選自由丙酮酸、α-酮戊二酸和草酰乙酸組成的組中的α-酮酸。

[3]一種膽固醇氧化酶的保存方法，其特征在于，使α-酮酸或其鹽在水性介質中與膽固醇氧化酶共存。

[4]如[3]所述的保存方法，其中，α-酮酸為選自由丙酮酸、α-酮戊二酸和草酰乙酸組成的組中的α-酮酸。

[5]一種膽固醇氧化酶的穩定化組合物，其特征在于，使α-酮酸或其鹽在水性介質中與膽固醇氧化酶共存。

[6]如[5]所述的穩定化組合物，其中，α-酮酸為選自由丙酮酸、α-酮戊二酸和草酰乙酸組成的組中的α-酮酸。

發明效果

根據本發明，提供適于長期保存的膽固醇氧化酶的穩定化方法、膽固醇氧化酶的保存方法及膽固醇氧化酶的穩定化組合物。

具體實施方式

本發明的膽固醇氧化酶的穩定化方法是特征在于使α-酮酸或其鹽在水性介質中與膽固醇氧化酶共存的方法。

本發明的膽固醇氧化酶的保存方法是特征在于使α-酮酸或其鹽在水性介質中與膽固醇氧化酶共存的方法。

本發明的膽固醇氧化酶的穩定化組合物是特征在于使α-酮酸或其鹽在水性介質中與膽固醇氧化酶共存的組合物。

在本發明中，“穩定”是指即使將膽固醇氧化酶長期保存也可維持膽固醇氧化酶的酶活性，具體而言是指，將膽固醇氧化酶的水溶液在5℃下保存2周，在5℃下保存2周后的膽固醇氧化酶活性為膽固醇氧化酶水溶液剛制備后的膽固醇氧化酶活性的75％以上。膽固醇氧化酶活性例如可以通過以下的方法來測定。