[發(fā)明專利]用于精煉微藻產(chǎn)生的角鯊烯的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380020310.3
• 申請日: 2013-04-15
• 公開（公告）號: CN104245076B
• 公開（公告）日: 2017-03-01
• 發(fā)明（設計）人: 菲利皮·盧騰;塞繆爾·帕蒂尼爾;邁克爾·佩呂;文森特·佩呂
• 申請（專利權）人: 羅蓋特兄弟公司
• 主分類號: B01D11/04
• 分類號: B01D11/04;A23L33/10;A61K8/97;A61Q19/00;C12N1/12;C12P5/02
• 代理公司: 中原信達知識產(chǎn)權代理有限責任公司11219
• 代理人: 楊青,穆德駿

本發(fā)明涉及用于精煉通過發(fā)酵產(chǎn)生的角鯊烯的方法，該方法始于微生物，更具體地始于微藻，甚至更具體地始于破囊壺菌目物種家族的那些。

在本發(fā)明的意義，“破囊壺菌目物種家族的微藻”意指屬于物種裂殖壺菌屬物種、Aurantiochytrium屬物種和破囊壺菌屬物種的微藻。

角鯊烯是存在于所有高等生物中的一種脂質，并且是動物和植物甾醇激素以及一些維生素(例如維生素D)的常見前體。

它存在于許多細胞膜中，從而為它們提供流動性。

這種不飽和直鏈烴是具有三十個碳原子和五十個氫原子的類異戊二烯，具有式：2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，C₃₀H₅₀，即它由6個全部處于反式構象的異戊二烯單元組成。

像所有的萜烯一樣，它是由異戊基焦磷酸酯形成，異戊基焦磷酸酯與二甲基烯丙基焦磷酸酯偶聯(lián)以相繼提供香葉基焦磷酸酯、然后是法呢基焦磷酸酯，在角鯊烯合成酶的作用下，兩個分子的法呢基焦磷酸酯在被NADPH還原后縮合以形成角鯊烯。

在植物和許多微生物中，這種途徑與其他代謝途徑共存，產(chǎn)生八氫番茄紅素，八氫番茄紅素是葉綠素、類胡蘿卜色素和膠乳中的萜烯的前體。

角鯊烯及其在末端雙鍵處環(huán)氧化的衍生物擁有被轉化的特性，歸因于值得注意地區(qū)域選擇性和立體選擇性地將酶(環(huán)化酶)特化到具有相當大的結構變異的多環(huán)三萜烯：真核生物中藿烯和里白醇的和原生動物中的四膜蟲醇(五環(huán)三萜烯)；酵母、真菌和哺乳動物中的羊毛甾醇和植物中的環(huán)羊毛甾醇(四環(huán)三萜烯)。

角鯊烯的應用

角鯊烯一直被使用，尤其是在日本，作為食品補充劑。

此外，是一個日本化學家，三丸辻本(Mitsumaru?Tsujimoto)，在1906年發(fā)現(xiàn)了它并在1916年確定它的結構。

它被認為是一種有效的抗氧化劑，在天然藥物中具有許多有益特性。

它的常規(guī)用途包括化妝品，雖然更常見地使用它的氫化的衍生物——未被氧化的角鯊烷，并因此不會變得腐臭。

當具有高純度，結合刺激免疫系統(tǒng)的佐劑時，角鯊烯已經(jīng)并且現(xiàn)在仍然被用在某些疫苗中：以“水包油”乳劑的形式，它充當表面活性劑，從而增加該疫苗的響應。

它被用在靶向新出現(xiàn)的病毒(例如H5N1和H1N1)的實驗性疫苗中，但尤其與季節(jié)性流感的抗原相結合，用在自1997年以來給予的2200萬劑的組合物中(MF59，以10mg/劑的比率)，沒有嚴重接種后反應。

目前對于某些不包含使免疫系統(tǒng)能夠采用適當?shù)姆烙鶛C制的信號的疫苗(滅活或亞單位疫苗)來說，添加佐劑、角鯊烯或鋁鹽(自1926年以來使用的)是必要的。

角鯊烯避免了重復注射的需要以確保良好保護。

角鯊烯的這些用途加強了本領域的普通技術人員具有用于生產(chǎn)高純度的角鯊烯的安全方法的決心。

此外，這種品質可以在醫(yī)學領域中開發(fā)其他應用路線。

在未來，在某些癌癥或者在HIV類型的病毒性疾病的治療中，角鯊烯與核苷類似物的化學偶聯(lián)可能會因此構成一個相當大的進步。

角鯊烯的各種來源

角鯊烯常規(guī)地是從深海鯊魚肝臟中提取。

然而，肝臟積累大量的有毒化合物，例如重金屬(包括汞)和其他脂溶性毒素。

毒理學研究表明，按照在化妝品中使用的濃度，角鯊烯及其氫化形式角鯊烷是無毒的并且對人類皮膚無刺激或不致敏。

然而，當用于醫(yī)學領域中，尤其是作為疫苗佐劑時，角鯊烯的純度水平是至關重要的。

因此具有角鯊烯的高品質、無雜質(痕量金屬，尤其是汞和其他毒素)是絕對有必要的。

除了從鯊魚肝提取外，在文獻中還提出了用于生產(chǎn)角鯊烯的幾個路線。

作為第一替代方案，它可以從橄欖油、棕櫚油，以及從其他谷類油或來源于莧菜、種子、米糠、以及小麥胚芽的油中分離。

然而，此處的主要缺點是從這些提取的是極少量的角鯊烯，大約0.1到0.7wt％，并且需要很多費力的和昂貴的純化步驟。

作為第二替代方案，首先提出了從微生物中生產(chǎn)角鯊烯的方法，并且更具體地是從天然酵母或重組酵母，尤其是酵母屬類型。

因此，已知釀酒酵母能夠生產(chǎn)角鯊烯，但量很小：大約0.041mg/g生物質(BHATTACHARJEE,P.(巴特查爾吉，P.)等人，2001，World?J.Microb.Biotechnol.(《世界微生物學和生物技術期刊》)，17，第811-816頁)。

因此通過基因重組嘗試了對這些生產(chǎn)的能力的優(yōu)化。