[發明專利]重組牛分枝桿菌菌株、免疫原性組合物和用途

有效

• 申請號: 201380020308.6
• 申請日: 2013-02-18
• 公開（公告）號: CN104271733B
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發明（設計）人: L·C·德塞凱拉·萊特;I·佩雷拉·納西門托
• 申請（專利權）人: 布坦坦基金會
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;A61K39/04;A61K39/108;A61P31/06;C12R1/32
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標代理有限公司11012
• 代理人: 王燕

本發明涉及重組分枝桿菌菌株，其編碼突變的大腸桿菌不耐熱毒素LT或突變的大腸桿菌不耐熱毒素的A亞單位。

本發明還涉及分枝桿菌菌株，其編碼在位置63處突變的大腸桿菌不耐熱毒素LT或不耐熱毒素LT的A亞單位。

具體地，本發明涉及分枝桿菌菌株，其編碼在位置63處由絲氨酸向賴氨酸突變的大腸桿菌不耐熱毒素LT或不耐熱毒素LT的A亞單位。

本發明還提供包括本發明的菌株的免疫原性組合物。

本發明還提供上述菌株和免疫學組合物在生產用于預防結核病以及由結核分枝桿菌引起的感染的疫苗中的用途。

最后，本發明涉及用于在動物中預防或治療結核病的方法。

發明背景

分枝桿菌

分枝桿菌構成放線菌綱的放線菌目的分枝桿菌科的分枝桿菌屬。形成這個屬的分枝桿菌形狀像稍微彎曲的棒體，測量的長度為1至10μm并且直徑為0.2至0.6μm。這些細菌不能被分類為革蘭陽性或革蘭陰性。這種桿菌最突出特點是其細胞包膜的復雜性質，所述包膜含有相對較高百分比的脂質，這些脂質包括分枝菌酸的長鏈。這種包膜賦予強疏水性，使其抗溶菌并且對于抗生素及其它化學劑比較不易透過。該桿菌被標記為耐酸-醇的，即：它們耐受在用品紅或類似染料染色之后由弱酸引起的變色。基因組DNA含有高含量的鳥苷/胞嘧啶，在58-79％之間，這損害了細菌大腸桿菌作為遺傳宿主的使用。這些方面被認為是用于將桿菌鑒定為分枝桿菌屬的成員的基本特征[ORME,I.(1995)Medical Intelligent Unit:Immunity to Mycobacteria.Austin:R.G.Lands Company,p.5；JAWETZ,E.,MELNICK,J.L.& ADELBERG,E.A.(1998)Medical Microbiology.第21版Appleton&Lange,Stamford,Connecticut；SHINNICK,T.M.&GOOD,R.C.(1994)Mycobacterial taxonomy.Eur J Clin Microbiol Infect M Dis 11:884-901]。

分枝桿菌已被分為兩個主要群組：生長遲緩的細菌，其具有大約13小時的傳代時間并且可能花費3周至3個月的培養時間以提供可見菌落；以及生長快速的細菌，其具有大約2至5小時的傳代時間。所述生長遲緩的分枝桿菌包括許多最大的動物以及人類病原體，如結核分枝桿菌、牛分枝桿菌、副結核分枝桿菌、鳥分枝桿菌、麻風分枝桿菌等等，而快速生長的分枝桿菌包括非致病性物種，如：恥垢分枝桿菌、金色分枝桿菌、牝牛分枝桿菌等等。5個致病性分枝桿菌種中的4個被分類在結核分枝桿菌復合物的組中，4個種的這組可能引起結核疾病(結核分枝桿菌、牛分枝桿菌、田鼠分枝桿菌以及非洲分枝桿菌)；第五個是麻風分枝桿菌，它是引起漢森氏病(Hansen’s disease)(非正式地稱為麻風病)的病原菌[SHINNICK,T.M.&GOOD,R.C.(1994)Mycobacterial taxonomy.Eur J Clin Microbiol Infect Dis 11:884-901；ORME,I.(1995)Medical Intelligent Unit:Immunity to Mycobacteria.Austin:R.G.Lands Company,第5頁；CONNELL,N.D.(2001)Expression systems for use in Actinomycetes and related organisms.Current Opinion in Biotechnology 12:446–449]。

結核分枝桿菌(MTB)主要經由呼吸道傳播并且雖然它可以在若干器官中引起疾病，但是肺結核是最常見的。據估計，世界人口的三分之一被桿菌感染并且2億人將表現出結核病癥狀，如果不采取控制和預防措施，那么到2020年其中3500萬可能死亡(WHO Annual Publication,2000)。

結核病的預防以及卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)的使用

在上世紀初，Albert Calmette和Camille Guérin使牛分枝桿菌的強毒株減毒。這個菌株目前被稱為卡介苗(BCG)，并且是目前成功使用的唯一的結核病疫苗(tuberculosis vaccine)，已經在全世界給藥超過30億個體。