[發明專利]在用于蛋白質表達的細胞系中減少酰胺化的氨基酸形成

在審

• 申請號: 201380020180.3
• 申請日: 2013-04-16
• 公開（公告）號: CN104903447A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發明（設計）人: 米哈埃拉·斯庫利;多米尼克·戈賽爾
• 申請（專利權）人: 力奇制藥公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12P21/00
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 鄧云鵬

1.一種用于蛋白質表達的細胞，其具有降低的肽酰胺化活性。

2.如權利要求1所述的細胞，其特征在于，所述降低的肽酰胺化活性是通過如下方式實現的：

a)抑制或降低編碼用于催化肽α－酰胺化的酶的基因的基因表達；

b)表達功能異常或失活的用于催化肽α－酰胺化的酶，或者表達具有降低活性的用于催化肽酰胺化的酶；和/或

c)抑制或降低用于催化肽α－酰胺化的酶的活性。

3.一種用于在給定細胞中降低肽酰胺化活性的方法，該方法包括選自下列集合中的至少一步驟：

a)抑制或降低編碼用于催化肽α－酰胺化的酶的基因的基因表達；

b)表達功能異常或失活的用于催化肽α－酰胺化的酶，或者表達具有降低活性的用于催化肽酰胺化的酶；和

c)抑制或降低用于催化肽α－酰胺化的酶的活性。

4.如上述任一權利要求所述的細胞或方法，其特征在于，降低的肽酰胺化活性是通過對編碼催化肽α-酰胺化的酶的基因進行下述至少一種改造方式來實現的：

基因沉默；

基因抑制；

基因敲除；

顯性負構造體的引入；

條件性基因敲除；和

基因變異。

5.如上述任一權利要求所述的細胞或方法，其特征在于，所述細胞是指真核細胞。

6.如上述任一權利要求所述的細胞或方法，其特征在于，所述細胞是指動物細胞和/或植物細胞。

7.如上述任一權利要求所述的細胞或方法，其特征在于，所述細胞是指哺乳動物細胞。

8.如上任一權利要求所述的細胞或方法，其特征在于，所述細胞是指重組細胞。

9.如上述任一權利要求所述的細胞或方法，其特征在于，所述細胞是選自下述集合中的至少一種：

幼倉鼠腎細胞(例如BHK21)；

中國倉鼠卵巢細胞(例如CHO-K1、CHO-DG44、CHO-DXB或CHO-dhfr)；

小鼠骨髓瘤細胞(例如SP2/0或NS0)；

人類胚胎腎細胞(例如HEK-293)；

人類視網膜源細胞(例如PER-C6)；和

羊水細胞(例如CAP)。

10.如上述任一權利要求所述的細胞或方法，其特征在于，用于催化肽酰胺化的酶是肽酰甘氨酸α-酰胺化單加氧酶(PAM)。

11.如上述任一權利要求所述的細胞或方法，其特征在于，用于催化肽酰胺化的所述酶的編碼基因的基因表達是通過RNA干擾(RNAi)的方式被抑制或降低。

12.如上述任一權利要求所述的細胞或方法，其特征在于，用于催化肽酰胺化的酶催化C-末端脯氨酸酰胺殘基的形成。

13.如上述任一權利要求所述的細胞在同源蛋白的表達上的用途。

14.如上述任一權利要求所述的細胞在異源蛋白的表達上的用途。

15.如權利要求13或14所述的用途，其中，所述蛋白質是選自如下集合中的至少一種蛋白質：

抗體或其片段或其衍生物；

融合蛋白；

抗體類似物；和

非抗體蛋白質。