[發明專利]表達包含VL結構域的重鏈的人源化嚙齒動物

有效

• 申請號: 201380017544.2
• 申請日: 2013-02-01
• 公開（公告）號: CN104202971A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: L·麥克唐納;C·古雷爾;K·A·梅格爾;S·史蒂文斯;A·J·莫菲
• 申請（專利權）人: 瑞澤恩制藥公司
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;C07K16/46;C12N9/64
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙)11400
• 代理人: 鄔玥;葛強

1.一種非人動物，所述動物包括：

(a)在非人源免疫球蛋白輕鏈恒定區上游的一個或多個人源V_L和一個或多個人源J_L基因區段的插入，

(b)在非人源免疫球蛋白重鏈恒定區上游的一個或多個人源V_L和一個或多個人源J_L基因區段的插入，以及

(c)編碼ADAM6蛋白或其功能性片段的核苷酸序列，其中所述ADAM6蛋白由異位ADAM6核酸序列表達。

2.根據權利要求1所述的非人動物，其中所述非人源重鏈和/或輕鏈恒定區是嚙齒動物恒定區。

3.根據權利要求1或2所述的非人動物，其中所述輕鏈恒定區是小鼠Cκ。

4.根據前述任意一項權利要求所述的非人動物，其中所述非人源免疫球蛋白輕鏈恒定區上游的人源V_L和J_L基因區段是人源Vκ和Jκ基因區段。

5.根據前述任意一項權利要求所述的非人動物，其中所述非人源免疫球蛋白重鏈恒定區上游的人源V_L和J_L基因區段是人源Vκ和Jκ基因區段。

6.根據前述任意一項權利要求所述的非人動物，其中編碼ADAM6蛋白或其功能性片段的核苷酸序列存在于與野生型非人源ADAM6基因座相比相同的位置。

7.根據前述任意一項權利要求所述的非人動物，其中編碼ADAM6蛋白或其功能性片段的核苷酸序列存在于免疫球蛋白基因區段中。

8.根據權利要求7所述的非人動物，其中所述免疫球蛋白基因區段是人源κ輕鏈基因區段。

9.根據權利要求7或8所述的非人動物，其中所述免疫球蛋白基因區段是非人動物的內源性重鏈基因區段。

10.根據前述任意一項權利要求所述的非人動物，其中所述非人動物包括在所述非人動物中不能重排以形成免疫球蛋白V_L結構域的內源性免疫球蛋白V_L和/或J_L基因區段。

11.一種基因修飾的非人動物，所述動物包括

(a)在所述非人動物內源性免疫球蛋白重鏈基因座的一個或多個未經重排的人源Vκ基因區段和一個或多個未經重排的人源Jκ基因區段，

(b)在所述非人動物內源性免疫球蛋白輕鏈基因座的一個或多個未經重排的人源Vκ基因區段和一個或多個未經重排的人源Jκ基因區段，其中所述非人動物能夠表達ADAM6蛋白或其功能性片段。

12.一種來源于權利要求1或11所述的非人動物的細胞。

13.根據權利要求12所述的細胞，其中所述細胞是B細胞。

14.一種由權利要求13所述的B細胞制備的雜交瘤。

15.根據權利要求12所述的細胞，其中所述非人動物是嚙齒動物。

16.根據權利要求15所述的細胞，其中所述嚙齒動物選自小鼠和大鼠。

17.一種制備與目標抗原結合的抗原結合蛋白的方法，其中所述方法包括

(a)將權利要求1或11所述的非人動物與目標抗原接觸，

(b)分離所述非人動物的一種或多種B淋巴細胞，其中所述一種或多種B淋巴細胞表達與所述目標抗原結合的V_L結合蛋白，

(c)鑒定核酸序列，所述核酸序列編碼所述與目標抗原結合的V_L結合蛋白的V_L結構域，其中所述V_L結合蛋白包括人源Vκ結構域和非人源輕鏈恒定結構域以及人源Vκ結構域和非人源重鏈恒定結構域，以及

(d)使用具有人源免疫球蛋白恒定區核酸序列的(c)中所述的核酸序列制備與目標抗原結合的人源抗原結合蛋白。

18.根據權利要求17所述的方法，其中所述V_L結合蛋白的非人源輕鏈恒定區是小鼠Cκ并且非人源重鏈恒定區是小鼠重鏈恒定區。

19.根據權利要求17或18所述的方法，其中所述非人源動物是小鼠。