[發明專利]脂肪酶變體以及編碼其的多核苷酸

有效

• 申請號: 201380017421.9
• 申請日: 2013-03-22
• 公開（公告）號: CN104204198B
• 公開（公告）日: 2018-09-25
• 發明（設計）人: J.思克喬德-喬爾根森;J.文德;A.斯文德森
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N15/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

1.一種脂肪酶變體，其由對應于SEQ ID NO：2的成熟多肽的位置的任何以下取代組組成：

S83T+E87T+G91L+N92D+F95Y+D96T+L97P+K98Q+T231R+N233R；

I86P+E87A+G91A+N94D+D96I+L97F+K98D+T231R+N233R；

S83T+R84G+I86D+E87Q+W89L+I90Q+G91L+N92E+L93T+N94S+F95Y+D96T+K98T+T231R+N233R；

D62C+S83T+E87C+G91L+N92D+F95Y+D96T+L97P+K98Q+T231R+N233R；

其中該變體具有脂肪酶活性，且在低濃度鈣的存在下與親本脂肪酶相比，該變體具有改進的洗滌性能，其中所述親本脂肪酶與SEQ ID NO:2具有至少99％序列一致性且獲自疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyces lanugiosus)。

2.如權利要求1所述的變體，其中所述親本脂肪酶是SEQ ID NO:2的成熟多肽。

3.如權利要求1或2的變體，該變體相對于親本具有一種改進的特性，其中該改進的特性選自：改進的催化速率；改進的比活性；改進的底物裂解；改進的蓋打開；降低的鈣離子依賴性；改進的助洗劑耐受性，或改進的洗滌性能。

4.一種編碼如權利要求1-3中任一項所述的變體的分離的多核苷酸。

5.一種包括如權利要求4所述的多核苷酸的核酸構建體。

6.一種包括如權利要求4所述的多核苷酸的表達載體。

7.一種包括如權利要求4所述的多核苷酸的宿主細胞，其中所述宿主細胞不是植物細胞。

8.一種產生脂肪酶變體的方法，該方法包括：

a.在適合于表達該變體的條件下培養如權利要求7所述的宿主細胞；并且

b.回收該變體。

9.一種產生如權利要求1-3中任一項所述的變體的方法，該方法包括：

a.在有益于產生該變體的條件下，培養包括一種編碼該變體的多核苷酸的一種轉基因植物或植物細胞；并且

b.回收該變體。

10.一種用于獲得脂肪酶變體的方法，該方法包括：在親本脂肪酶中在對應于SEQ IDNO：2的成熟多肽的位置處引入任何以下取代組：

S83T+E87T+G91L+N92D+F95Y+D96T+L97P+K98Q+T231R+N233R；

I86P+E87A+G91A+N94D+D96I+L97F+K98D+T231R+N233R；

S83T+R84G+I86D+E87Q+W89L+I90Q+G91L+N92E+L93T+N94S+F95Y+D96T+K98T+T231R+N233R；

D62C+S83T+E87C+G91L+N92D+F95Y+D96T+L97P+K98Q+T231R+N233R；

其中該變體具有脂肪酶活性，且在低濃度鈣的存在下與親本脂肪酶相比，該變體具有改進的洗滌性能，其中所述親本脂肪酶與SEQ ID NO:2具有至少99％序列一致性且獲自疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyces lanugiosus)。

11.權利要求10的方法，其中所述親本脂肪酶是SEQ ID NO:2的成熟多肽。

12.一種包括如權利要求1-3中任一項所述的變體的組合物。

13.如權利要求12所述的組合物，處于一種單位劑型。