[發(fā)明專利]在針對產(chǎn)丁醇生物的培養(yǎng)基中補充乙酸鹽

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380015950.5
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN104284981A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: L.A.馬格吉奧-哈爾
• 申請（專利權(quán)）人: 布特馬斯先進生物燃料有限責任公司
• 主分類號: C12P7/16
• 分類號: C12P7/16;C12N1/18;C12N9/04;C12N9/02;C12N9/88
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;李炳愛

1.生產(chǎn)丁醇的方法，包括：

a)提供重組宿主細胞，所述重組宿主細胞包含：

i)經(jīng)工程化的丁醇生物合成途徑；以及

b)使a)的宿主細胞與發(fā)酵培養(yǎng)基接觸，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包含：

i)可發(fā)酵的碳底物；和

ii)足以改善所述宿主細胞的生長或改善丁醇的產(chǎn)生中的至少一個的量的乙酸鹽，其中將所述乙酸鹽加入到所述發(fā)酵培養(yǎng)基；

其中所述重組宿主細胞已經(jīng)經(jīng)工程化以降低或消除丙酮酸脫羧酶(PDC)活性；并且

由此經(jīng)由所述經(jīng)工程化的丁醇生物合成途徑來直接由所述可發(fā)酵的碳底物產(chǎn)生丁醇。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中至少一種編碼丙酮酸脫羧酶的內(nèi)源基因是滅活的。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述內(nèi)源基因是PDC1、PDC5、PDC6、或它們的組合。

4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述宿主細胞已經(jīng)經(jīng)工程化或進化以包含降低或消除的對于用于它們生長的外源二碳底物補充物的需求。

5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述宿主細胞包含編碼具有磷酸解酮酶活性的多肽的異源多核苷酸和編碼具有磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶活性的多肽的異源多核苷酸。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述重組宿主細胞已經(jīng)經(jīng)工程化以降低或消除醛脫氫酶活性。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中編碼醛脫氫酶的內(nèi)源基因是滅活的。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述內(nèi)源基因是ALD2、ALD3、ALD4、ALD5、ALD6、或它們的組合。

9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中丁醇的產(chǎn)生是改善的。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中丁酸的產(chǎn)生是下降的。

11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中丁醇的收率或有效滴度是提高的。

12.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述丁醇是異丁醇或1-丁醇、或它們的組合。

13.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述丁醇生物合成途徑包括下列底物至產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化：

a)丙酮酸至乙酰乳酸(途徑步驟a)；

b)來自a)的乙酰乳酸至2，3-二羥基異戊酸(途徑步驟b)；

c)來自b)的2，3-二羥基異戊酸至α-酮異戊酸(途徑步驟c)；

d)來自c)的α-酮異戊酸至異丁醛(途徑步驟d)；以及

e)來自d)的異丁醛至異丁醇(途徑步驟e)；

并且其中

i)步驟a)的底物至產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化是通過乙酰乳酸合酶進行的；

ii)步驟b)的底物至產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化是通過乙酰羥酸異構(gòu)還原酶進行的；

iii)步驟c)的底物至產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化是通過二羥酸脫水酶進行的；

iv)步驟d)的底物至產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化是通過α-酮酸脫羧酶進行的；并且

v)步驟e)的底物至產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化是通過醇脫氫酶進行的；

由此經(jīng)由所述經(jīng)工程化的丁醇生物合成途徑來直接由丙酮酸產(chǎn)生異丁醇。