[發明專利]間充質干細胞調理的基質及其產生和使用方法

無效

• 申請號: 201380014921.7
• 申請日: 2013-02-13
• 公開（公告）號: CN104204192A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 托尼·佩萊德;雅爾·斯坦哈特
• 申請（專利權）人: 加米達細胞有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/071;A61K35/28
• 代理公司: 北京京萬通知識產權代理有限公司 11440
• 代理人: 齊曉靜

1.一種制備調理的細胞培養基的方法，該方法包括(a)在包含煙酰胺的基質中培養間充質干細胞群，和(b)收集該調理的細胞培養基。

2.權利要求1的方法，其中在包含煙酰胺和成纖維細胞生長因子4(FGF4)的基質中實施所述培養所述間充質干細胞群。

3.制備調理的細胞培養基的方法，該方法包括(a)在包含煙酰胺和成纖維細胞生長因子4(FGF4)的基質中培養間充質干細胞群和(b)收集該調理的細胞培養基。

4.權利要求1-3中任一項的方法，其中在包含DMEM中的基質中實施所述培養。

5.權利要求1-4中任一項的方法，其中在包含血清或血小板裂解物的基質中實施所述培養。

6.權利要求1-5中任一項的方法，其中該間充質干細胞由選自骨髓、脂肪組織、胎盤和臍帶血的所組成的組的組織取得。

7.權利要求1-6中任一項的方法，其中所述煙酰胺選自由煙酰胺、煙酰胺類似物、煙酰胺代謝產物、煙酰胺類似物代謝產物及其衍生物所組成的組。

8.權利要求1-6中任一項的方法，其中在塑料表面上實施所述培養。

9.權利要求8的方法，其中所述間充質干細胞為粘附塑料的細胞。

10.權利要求1-9中任一項的方法，其中所述MSC群包含于異質細胞群中。

11.權利要求10的方法，其中所述異質細胞群的至少70％為MSC。

12.權利要求1-11中任一項的方法，其中所述基質的鈣濃度大于1.8mM。

13.權利要求1-12中任一項的方法，其中實施所述培養至少1個星期。

14.權利要求1-13中任一項的方法，其中實施所述培養至少3次傳代。

15.權利要求1-14中任一項的方法，其中所述煙酰胺的濃度為1-20mM。

16.權利要求2-15中任一項的方法，其中所述FGF4的濃度為10-100ng/ml。

17.權利要求1-15中任一項的方法，其中在沒有血小板衍生的生長因子(PDGF)或成纖維細胞生長因子2(FGF2)或兩者的介質中實施所述培養。

18.權利要求1-17中任一項的方法，其中所述培養所述間充質干細胞群包括在沒有煙酰胺的基質中培養間充質干細胞群第一時間段；然后在包含煙酰胺和FGF4的基質中培養所述群第二時間段。

19.權利要求1-18中任一項的方法，其中在不誘發所述間充質干細胞的分化的條件下實施所述培養。

20.權利要求18的方法，其中所述沒有煙酰胺的基質沒有FGF4。

21.權利要求18的方法，其中所述沒有煙酰胺的基質包含FGF4。

22.權利要求18的方法，其中實施所述在所述沒有煙酰胺的基質中的培養至少一天。

23.權利要求22的方法，其中實施所述的在所述沒有煙酰胺的基質中的培養至少一個星期。

24.權利要求1-23的方法，還包括濃縮所述調理的基質。

25.權利要求1-24中任一項的方法，其中將所述間充質干細胞在包含血清的培養基中培養第一時間段，然后在不含血清的培養物中培養第二時間段，并且其中從所述第二時間段的培養物收集所述調理的基質。

26.權利要求25的方法，其中所述第二時間段為24-48小時。

27.間充質干細胞調理的基質，其通過權利要求1-26中任一項的方法生產。

28.間充質干細胞調理的基質，其包含1-20mM煙酰胺、降低水平的IL-6，并且其中所述調理的基質具有抗發炎和促有絲分裂的活性。

29.權利要求27或28的調理的基質，其中所述調理的基質的特征在于：與來自在沒有添加煙酰胺而培養的間充質干細胞的調理的基質中所述至少一種因子的水平相比，提高水平的至少一種選自由HGF、KGF和TGFβ所組成的組中的生物活性因子。