[發(fā)明專利]用于通過(guò)核酸聚合酶對(duì)襯底多核苷酸進(jìn)行大小受控的同聚物加尾的方法和組合物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380014044.3
• 申請(qǐng)日: 2013-03-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104395480B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 弗拉基米爾·馬卡羅夫;勞里·庫(kù)里哈拉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 斯威夫特生物科學(xué)公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 中原信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司11219
• 代理人: 楊青,穆德駿

1.一種試劑盒，其包含：

模板非依賴性核酸聚合酶；

衰減子多核苷酸，其包含衰減子序列和定位在所述衰減子序列附近的序列W，其中所述衰減子序列的長(zhǎng)度為10至100個(gè)核苷酸，其中所述衰減子多核苷酸包含選自至少一個(gè)核糖核苷酸、至少一個(gè)脫氧核苷酸、C3間隔區(qū)、磷酸、雙脫氧核苷酸、氨基以及反向脫氧胸苷的3'封閉基團(tuán)；

銜接子多核苷酸，其中所述銜接子多核苷酸包含與所述衰減子多核苷酸的序列W互補(bǔ)的序列X；

與衰減子序列互補(bǔ)的核苷酸；以及

連接酶，

其中所述衰減子多核苷酸控制通過(guò)模板非依賴性核酸聚合酶添加至襯底多核苷酸的核苷酸尾部，以及其中所述銜接子多核苷酸與序列W雜交并被連接至襯底多核苷酸的所述核苷酸尾部。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中所述模板非依賴性核酸聚合酶為末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)。

3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中所述模板非依賴性核酸聚合酶為RNA特異性核苷酸轉(zhuǎn)移酶，其選自由聚(A)聚合酶和聚(U)聚合酶組成的組。

4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述衰減子序列包含10個(gè)核苷酸。

5.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述衰減子序列包含20個(gè)核苷酸。

6.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述衰減子序列包含30個(gè)核苷酸。

7.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述衰減子序列包含50個(gè)核苷酸。

8.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述衰減子序列包含100個(gè)核苷酸。

9.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述衰減子多核苷酸是能降解的或能被替代的。

10.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述銜接子多核苷酸包含5'磷酸。

11.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述連接酶是DNA連接酶或RNA連接酶。

12.如權(quán)利要求11所述的試劑盒，所述試劑盒進(jìn)一步包含引物、聚合酶和第二銜接子多核苷酸，所述第二銜接子多核苷酸包含序列Y和序列V，其中當(dāng)序列V具有與序列Y相同的長(zhǎng)度時(shí)，序列V與序列Y互補(bǔ)，或者其中當(dāng)序列V的長(zhǎng)度小于序列Y的長(zhǎng)度時(shí)，序列V與序列Y的部分互補(bǔ)，所述第二銜接子多核苷酸是與所述衰減子多核苷酸分開(kāi)的分子。

13.如權(quán)利要求10所述的試劑盒，其中所述衰減子多核苷酸包含用于固定的親和標(biāo)記。

14.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述衰減子多核苷酸的衰減子序列包含(1)選自由聚(dA)、聚(dT)、聚(dC)、聚(dG)、聚(dU)、聚(rA)、聚(U)、聚(rC)、聚(rG)組成的組的同聚序列或者(2)包含以下組合的雜聚序列：

(i)dA與rA堿基、

(ii)dT、dU與U堿基、

(iii)dC與rC堿基，或

(iv)dG與rG堿基，

或者所述衰減子序列包含二核苷酸序列，所述二核苷酸序列包含多個(gè)隨機(jī)序列，所述隨機(jī)序列包含以下二核苷酸組合：(i)dG和dC；(ii)dA和dT；(iii)dG和dT；(iv)dG和dA；(v)dA和dC；或(vi)dC和dT，

或者所述衰減子分子包含二核苷酸序列，所述二核苷酸序列包含核糖核苷酸與脫氧核糖核酸的混合物。