[發明專利]抗癌劑的篩選方法、以及以增大顆粒酶M的活性的物質為有效成分的誘導細胞死亡的抗癌劑無效

申請號：	201380013465.4	申請日：	2013-03-13
公開（公告）號：	CN104169431A	公開（公告）日：	2014-11-26
發明（設計）人：	久保田俊一郎;佐藤元彥;王麗云	申請（專利權）人：	LSIP基金運營聯合公司;久保田俊一郎
主分類號：	C12Q1/37	分類號：	C12Q1/37;A61K31/7042;A61K33/24;A61K35/00;A61K45/00;A61P35/00;A61P35/02;C12Q1/02;G01N33/15
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摘要：
搜索關鍵詞：	抗癌劑篩選方法以及增大顆粒活性物質有效成分誘導細胞死亡
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及抗癌劑的篩選方法、以及以增大顆粒酶M(granzyme?M)的活性的物質為有效成分的誘導細胞死亡的抗癌劑。

背景技術

癌癥在大多數國家是三大死因之一，社會上迫切希望開發出新型的癌治療藥。至今，開發了大量的抗癌劑，對癌治療作出了貢獻。

作為在免疫學領域中已經確立的生物體內的機理，可以列舉使天然殺傷(NK)細胞、細胞毒性T細胞攻擊癌細胞、病毒感染細胞，誘導細胞死亡的機理。該機理中，首先，NK細胞、細胞毒性T細胞分泌穿孔素(perforin)，在癌細胞、病毒感染細胞的細胞膜開孔，以該狀態分泌顆粒酶，侵入細胞內，分解各種細胞內的蛋白質，由此，誘導細胞死亡(參照圖15)。

顆粒酶是絲氨酸蛋白酶，已知在人類中存在A、B、H、K、M五個種類(非專利文獻1)。其中，關于顆粒酶B，在膀胱癌細胞中表達，分解周圍細胞的細胞外基質，由此顯示參與癌的浸潤(非專利文獻2)。

現有技術文獻

非專利文獻

非專利文獻1：CL?Ewen,K?P?Kane,and?RCBleackley.Review.A?quarter?centyry?of?granzymes.Cell?Death?and?Differentiation.advance?online?publication?4November?2011

非專利文獻2：D’Eliseo?D,Pisu?P,Romano?C,Tubaro?A,De?Nunzio?C,Morrone?S,Santoni?A,Stoppacciaro?A,Velotti?F.Granzyme?B?is?expressed?in?urothelial?carcinoma?and?promotes?cancer?cell?invasion.Int.J.Cancer?127,1283-1294(2010).

發明內容

發明所要解決的課題

但是，癌的種類多樣，新型的抗癌劑的開發在今后也是不可或缺的。因此，為了開發新型的抗癌劑，需要利用以往沒有的治療機理的篩選方法。

本發明是鑒于上述實際情況作出的，目的在于提供利用新型的治療機理的抗癌劑的篩選方法、以及以增大顆粒酶M的活性的物質為有效成分的誘導細胞死亡的抗癌劑。

用于解決課題的方法

本發明的發明人發現，被認為只存在于NK細胞、細胞毒性T細胞的顆粒酶M意外地在人類血液癌細胞(培養白血病細胞)中具有活性且表達。并且，發現AraC(阿糖胞苷)使顆粒酶M活化，分解作為細胞生存因子的NPM(nucleophosmin，核仁磷酸蛋白)，引起白血病細胞(U937和HL60)的細胞死亡。即，本發明的發明人發現，若使顆粒酶M活化，則可以誘導癌細胞的細胞死亡(apoptosis，凋亡)，從而完成了本發明。具體而言，本發明提供以下的方面。

(1)一種抗癌劑的篩選方法，具有：

對癌細胞投與被檢測物質的工序；和

檢測上述癌細胞表達的顆粒酶M的活性，選擇確認了上述活性的增大的上述被檢測物質工序。

(2)一種抗癌劑的篩選方法，具有：

對癌細胞投與被檢測物質的工序；和

檢測有無通過上述癌細胞表達的顆粒酶M的活化所誘導的所述癌細胞的細胞死亡，選擇確認了上述細胞死亡的上述被檢測物質的工序。

(3)如(1)或(2)所述的方法，其中，上述癌細胞為實體癌細胞或血液癌細胞。

(4)如(1)～(3)中任一項所述的方法，其中，不對上述癌細胞投與穿孔素。

(5)如(1)～(4)中任一項所述的方法，其中，上述被檢測物質為低分子化合物。

(6)一種以增大顆粒酶M的活性的物質為有效成分的誘導細胞死亡的抗癌劑。

(7)如(6)所述的抗癌劑，其中，增大顆粒酶M的活性的物質為AraC，且誘導血液癌細胞的細胞死亡。

(8)如(7)所述的抗癌劑，其中，血液癌為白血病。