[發(fā)明專利]用于分析物的檢測(cè)和測(cè)量的方法和裝置

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380013386.3
• 申請(qǐng)日: 2013-01-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104379724B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: B·D·卡梅倫;D-S·吉姆
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 托萊多大學(xué)
• 主分類號(hào): C12M1/34
• 分類號(hào): C12M1/34;B05D3/00;A61K49/00
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所11038
• 代理人: 袁泉

1.用于優(yōu)化針對(duì)一種或多種分析物的感應(yīng)器的靈敏度和/或選擇性的方法，包括

將一種或多種類型的適體連接到具有自組裝單層(SAM)連接的基質(zhì)上，所述SAM連接具有所需的連接間距和/或長(zhǎng)度以在基質(zhì)上形成功能化的表面，

其中所述SAM連接是二元SAM連接，其包含穩(wěn)定性增強(qiáng)巰基化合物，所述巰基化合物具有能夠與適體形成共價(jià)鍵的羧基部分，以及抗蛋白質(zhì)吸附化合物，所述化合物能夠抑制蛋白質(zhì)的非特異性吸附同時(shí)保持所附著適體的穩(wěn)定性，

為了基于分析物和/或適體特性來(lái)優(yōu)化表面等離子共振(SPR)、拉曼光譜法、或熒光光譜法中至少一種的靈敏度和選擇性來(lái)選擇所需的連接間距和/或長(zhǎng)度；

其中所述SAM連接包含在基質(zhì)上的(1-巰基-11-十一烷基)三(乙二醇)和二硫代二-N-琥珀酰亞胺丙酸鹽(DTSP)，

使用包括如下的步驟形成感應(yīng)器：

a)在基質(zhì)上吸附由3-巰基丙酸(MPA)和(1-巰基-11-十一烷基)三(乙二醇)構(gòu)成的二元組件；

b)從步驟a)的基質(zhì)上還原解吸附MPA；

c)在步驟b)的基質(zhì)上形成二硫代二-N-琥珀酰亞胺丙酸鹽(DTSP)層；

d)在步驟c)的基質(zhì)上固定化至少一種類型的適體；并且，

e)將未結(jié)合的適體從步驟d)的基質(zhì)上的(1-巰基-11-十一烷基)三(乙二醇)中去除，由此留下附著在基質(zhì)的DTSP層上的適體。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述SAM連接的至少一種堆積密度和/或長(zhǎng)度影響表面等離子共振(SPR)信號(hào)。

3.權(quán)利要求1的方法，其中(1-巰基-11-十一烷基)三(乙二醇)防止蛋白質(zhì)的非特異性吸附，而且

其中在DTSP上的羧基部分與適體形成穩(wěn)定鍵合。

4.用于形成針對(duì)一種或多種分析物的感應(yīng)器的方法，包括：

a)在基質(zhì)上吸附由3-巰基丙酸(MPA)和(1-巰基-11-十一烷基)三(乙二醇)構(gòu)成的二元組件；

b)從步驟a)的基質(zhì)上還原解吸附MPA；

c)在步驟b)的基質(zhì)上形成二硫代二-N-琥珀酰亞胺丙酸鹽(DTSP)層；

d)在步驟c)的基質(zhì)上固定化至少一種類型的適體；并且，

e)將未結(jié)合的適體從步驟d)的基質(zhì)上的(1-巰基-11-十一烷基)三(乙二醇)中去除，由此留下附著在基質(zhì)的DTSP層上的適體。

5.用于形成針對(duì)一種或多種分析物的感應(yīng)器方法，包括：

a)在乙醇溶液中在金表面基質(zhì)上吸附由3-巰基丙酸(MPA)和(1-巰基-11-十一烷基)三(乙二醇)構(gòu)成的二元組件；

b)在0.5M KOH溶液中從步驟a)的基質(zhì)上還原解吸附MPA，其中通過(guò)對(duì)溶液施加30分鐘-1.2V的電勢(shì)而選擇性地還原在MPA和(1-巰基-11-十一烷基)三(乙二醇)的相分離的二元自組裝單層(SAM)中所吸附的MPA；

c)將其上具有(1-巰基-11-十一烷基)三(乙二醇)層的步驟b)的基質(zhì)浸入1mM DTSP溶液中，以在其上形成DTSP層；

d)在步驟c)的基質(zhì)上固定化至少一種類型的適體；并且

e)將適體從步驟d)的基質(zhì)上的(1-巰基-11-十一烷基)三(乙二醇)中去除，由此留下附著在基質(zhì)的DTSP層上的適體。

6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其中所述分析物包括血液中蛋白質(zhì)的糖基化形式。

7.權(quán)利要求6的方法，其包括確定總血清蛋白水平中的一部分糖基化蛋白。

8.用于檢測(cè)一種或多種分析物的試劑盒，其包括：通過(guò)權(quán)利要求6或7的方法形成的感應(yīng)器；和包含感應(yīng)器的至少一個(gè)容器，其中樣品添加到所述容器中。

9.權(quán)利要求8的試劑盒，其還包括一種或多種固體支持物；用于從洗脫物中分離感應(yīng)器的一種或多種分離劑，以及用于從感應(yīng)器中分離適體的一種或多種試劑。

10.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其中所述分析物包括如下的一種或多種：人血紅蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、纖維蛋白原和/或其片段，所述分析物是非糖基化或糖基化形式。

11.權(quán)利要求10的方法，其中所述白蛋白是人血清白蛋白(HSA)。