[發明專利]使用可裂解探針檢測c-Met基因的方法

有效

• 申請號: 201380013315.3
• 申請日: 2013-01-09
• 公開（公告）號: CN104160026A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 金桄佑;金鐘源;南都鉉;奇昌錫
• 申請（專利權）人: 社會福祉法人三星生命公益財團
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 余剛;張英

技術領域

本發明涉及癌癥診斷試劑盒和使用其的診斷方法。更具體地，本發明涉及通過使用引物組和可裂解探針使得能夠實時地檢測基因的試劑盒以及使用其的診斷方法。

背景技術

c-Met是肝細胞生長因子(HGF)受體，而HGF是一種細胞因子，其結合至c-Met受體酪氨酸激酶的胞外區以引起各種正常細胞和腫瘤細胞中的分裂、移動、形態發生和血管生成。c-Met是存在于細胞表面的代表性的受體酪氨酸激酶。與HGF無關(其是配體)，由于c-Met自身也是致癌基因并且有時參與多種相關的機制如腫瘤發生、轉移、癌癥細胞遷移，癌癥細胞侵襲和血管生成，因此c-Met是作為抗癌靶而引起關注的蛋白質。

此外，c-Met在許多類型的癌癥中過表達。特別地，已知c-Met過表達主要涉及患者預后不良的原因。因此，可以使用可以特異性地擴增c-Met基因的引物組以通過使用取自患者的臨床樣品來測量患者中的癌癥發展。此外，引物組可以被用作選擇癌癥治療劑或治療方法的重要決策信息。因此，需要開發特異性地結合至c-Met的基因或mRNA的引物或探針，或者能夠驗證c-Met基因或mRNA的過表達程度的診斷試劑盒。

最近，聚合酶鏈反應(PCR)被用于檢測或擴增基因。利用PCR技術實現高通量PCR篩選已經引起了現代生物學和醫學的創新性變革。分析技術對包括診斷、環境監測、血液檢測和基因型分析在內的許多研究領域產生了重大影響。隨著生物信息學時代的到來，科學家處理基因信息的能力超過以往任何時候。然而，為了能夠檢測較小量的DNA并實時驗證DNA擴增量，許多相關研究仍在進行。

因此，改進PCR方法以開發檢測c-Met基因的方法，其可以在癌癥診斷中更加有效地使用。在以上結果的基礎上，開發了本發明的基于探針的檢測試劑盒和診斷方法。

發明內容

技術問題

本發明的一種實施方式提供了c-Met基因檢測試劑盒，該檢測試劑盒包含引物組和可裂解探針(cleavable?probe)。

本發明的另一種實施方式提供了通過使用含有引物組和可裂解探針的c-Met基因檢測試劑盒檢測c-Met基因的方法。

技術方案

根據本發明的一個方面，提供了用于檢測c-Met基因的表達的檢測試劑盒，其中，檢測試劑盒包括：特異性結合至c-Met基因的引物組；特異性地結合至由引物組擴增的c-Met擴增產物的內部的可裂解探針。

本發明的一個實施方式提供了c-Met基因檢測試劑盒，包括含有SEQ?ID?NO:1的核酸的引物、含有SEQ?ID?NO:2的核酸的引物和含有SEQ?ID?NO:7的核酸的可裂解探針。

本發明的另一個實施方式提供了c-Met基因檢測試劑盒，包括含有SEQ?ID?NO:3的核酸的引物、含有SEQ?ID?NO:4的核酸的引物和含有SEQ?ID?NO:8的核酸的可裂解探針。

本發明的另一個實施例，提供了c-Met基因檢測試劑盒，包括含有SEQ?ID?NO:5的核酸的引物、含有SEQ?ID?NO:6的核酸的引物和含有SEQ?ID?NO:9的核酸的可裂解探針。

本文使用的術語“c-Met基因”是指編碼結合到肝細胞生長因子(HGF)的受體酪氨酸激酶的基因。例如，c-Met基因可以對應于GenBank登錄號NM_000245或GenBank登錄號NM_000236。

c-Met蛋白在許多類型的癌癥中過表達。特別地，已知c-Met過表達主要涉及患者中預后不良的原因。通過測定可能引起c-Met蛋白過表達的c-Met基因的過表達可以診斷的癌癥類型包括腫瘤(惡性上皮腫瘤，carcinoma)、淋巴瘤、母細胞瘤(blastoma)、肉瘤和白血病等，但不限于此。癌癥(cancer)包括，例如，膀胱癌、乳癌(breast?cancer)、子宮頸癌、膽管癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、食道癌、胃癌、頭頸癌、腎癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、膽囊癌、前列腺癌、甲狀腺癌、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、滑膜肉瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、纖維肉瘤、成人T細胞白血病、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、神經母細胞瘤/星形細胞瘤、黑色素瘤、間皮瘤和腎母細胞瘤，但不限于此。

本文所用的術語“引物”可以與“寡核苷酸”或“多核苷酸”互換地使用。引物是指在PCR中用作DNA合成的起點的寡核苷酸。引物通常包含約15至約35個核苷酸，并與靶序列的互補區雜交。