[發明專利]丙型流感病毒和疫苗

在審

• 申請號: 201380012424.3
• 申請日: 2013-01-28
• 公開（公告）號: CN104203972A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: R·R·西門遜;E·A·科林;B·M·豪瑟
• 申請（專利權）人: 新港實驗室股份有限公司
• 主分類號: C07K14/11
• 分類號: C07K14/11;A61P31/16;A61K39/145
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 劉曉東

通過引用并入

本申請要求2012年1月27日提交的美國專利申請系列號13/385,004的優先權，將其公開內容通過引用并入本文。

發明背景

丙型流感病毒是人的常見病原體，因為大部分個體在兒童時已被感染。丙型流感病毒引發與普通感冒相似的輕微呼吸道疾病。中國有一則關于從豬分離出丙型流感病毒的報導(Yuanji和Desselberger?1984,J.Gen.Virol.65:1857-72)。此外，該工作顯示豬丙型流感病毒可感染豬并在豬間傳播。幾篇其它論文已在豬中鑒定了與丙型流感病毒反應的抗體，表明豬是丙型流感病毒的儲藏庫或人極普遍地將該病毒傳播給豬(Kimura等人1997,Virus?Res.48:71-9；Yamaoka等人1991,J?Gen?Virol.72:711-714；Brown等人1995,Epidemiol.Infect.114:511-20；Ohwada等人1987,Microbiol?Immunol.31:1173-80)。

發明概述

由于丙型流感病毒僅在一篇論文中被報導，因此在豬中發現其非常罕見。已被分離和表征的病毒是丙型流感病毒的一種非常獨特的變體。該病毒與已知的丙型流感病毒的總體百分比同源性僅為約65％，顯示這是一個從未描述過的并且與已描述過的病毒僅有遠緣關系的全新病毒譜系。該低水平的同源性表明針對典型人丙型流感病毒制備的疫苗不能保護免受C/swine/Oklahoma/1334/2011的侵害。“通用”丙型流感病毒引物組也不能檢測該病毒的發現也說明其新穎性。此外，人和豬中抗體滴度的發現以及該病毒在豬和白鼬中復制的能力表明該病毒能夠引發豬和人的疾病。我們顯示我們可產生保護豬免受感染的疫苗，并且科學文獻也支持該疫苗可保護人類。

在一個方面，本發明是一種與先前鑒定的任何丙型流感病毒僅具有低同源性的新型丙型流感病毒。攻擊研究顯示該病毒可感染豬，并且可在豬間傳播。此外，丙型流感病毒通常被認為是人病原體，并且已進行了血清學研究，以查看抗該病毒的抗體在豬和人中的發生率。約10％的豬和30％的人具有針對該病毒的抗體。進一步的實驗數據顯示該病毒可感染白鼬(人感染研究的替代者)并在其間傳播。

在第二方面，本發明是針對該新型丙型流感病毒的疫苗。

在第三方面，本發明是該新型丙型流感病毒的部分基因組。

在另一個方面，本發明是檢測動物中該新型丙型流感病毒的方法。

附圖概述

圖1是本發明的新型丙型流感病毒的電子顯微鏡照片。

圖2是顯示接種和非接種的豬中HI滴度的圖。

圖3是顯示接種和非接種的豬中實時PCR閾值的圖。

圖4是顯示用本發明的病毒攻擊的白鼬的組織培養物感染劑量的圖。

優選實施方案的詳述

病毒的分離

提交給Newport實驗室的樣品是來自顯示流感樣疾病體征的豬的鼻拭子。通過實時逆轉錄PCR顯示樣品對于甲型流感是陰性的。將樣品的等分施加于豬睪丸(ST)細胞的匯合單層以試圖生長其中存在的任何病毒。5天后，致細胞病變效應顯著，表明病毒正在豬睪丸細胞中生長。通過QPCR分析細胞培養上清液樣品的甲型流感，樣品呈陰性。分析細胞培養上清液使火雞紅細胞發生紅血球凝集(紅細胞凝集測定)的能力。按照下列方案(實施例#1)進行紅細胞凝集測定。

實驗#1

1.0?導言

定量豬流感病毒。

2.0?材料

·儲液池

·96孔微量滴定V型底板

·多通道移液器和吸頭(10-200μL)

·100-1000μL移液器

·10-100μL移液器

·移液器吸頭

·個人防護設備(PPE:實驗工作服、防護眼鏡、手套)

·生物安全操作箱

·蓋板/蓋

·定時器

·50mL?falcon管

·離心機

3.0?試劑/培養基

·來自Lampire的火雞紅細胞(TRBC)

·1X?DPBS

4.0?培養基制劑

火雞紅細胞溶液(0.5％)