[發(fā)明專利]測定(D)?2?羥基戊二酸(D2HG)或(D)?2?羥基己二酸的工具和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380011978.1
• 申請日: 2013-03-01
• 公開（公告）號: CN104145022B
• 公開（公告）日: 2017-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: J·巴爾斯;S·普施;A·馮戴姆靈;W·布克爾
• 申請（專利權(quán)）人: 德國癌癥研究中心;魯普萊希特-卡爾海德堡大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/00
• 分類號: C12Q1/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所11247
• 代理人: 黃革生,劉金輝

1.試劑混合物在制造用于檢測樣品中的(D)-2-羥基戊二酸或(D)-2-羥基己二酸的方法的試劑盒中的用途，所述方法包括:

a)將樣品與試劑混合物接觸，其中所述試劑混合物包含:

(i)溶劑,

(ii)具有氧化態(tài)和還原態(tài)的染料,其中還原態(tài)能夠與氧化態(tài)區(qū)分并且其中染料初始以氧化態(tài)存在,

(iii)電子轉(zhuǎn)移劑,

(iv)(D)-2-羥基戊二酸脫氫酶,和

(v)輔因子；和

b)通過測量染料的還原態(tài)的生產(chǎn)檢測(D)-2-羥基戊二酸或(D)-2-羥基己二酸。

2.試劑混合物在制造用于診斷和/或監(jiān)控對象中(D)-2-羥基戊二酸相關(guān)的疾病的方法的試劑盒中的用途,所述方法包括:

a)將所述對象的樣品與試劑混合物接觸,其中所述試劑混合物包含:

(i)溶劑,

(ii)具有氧化態(tài)和還原態(tài)的染料,其中還原態(tài)能夠與氧化態(tài)區(qū)分并且其中染料初始以氧化態(tài)存在,

(iii)電子轉(zhuǎn)移劑,

(iv)(D)-2-羥基戊二酸脫氫酶,和

(v)輔因子；和

b)通過測量染料的還原態(tài)的生產(chǎn)檢測(D)-2-羥基戊二酸,從而診斷和/或監(jiān)控所述對象中(D)-2-羥基戊二酸相關(guān)的疾病。

3.權(quán)利要求2的用途，其中所述(D)-2-羥基戊二酸相關(guān)疾病是選自由彌散性神經(jīng)膠質(zhì)瘤、急性髓性白血病(AML)、軟骨肉瘤、膽管癌和甲狀腺癌組成的組的腫瘤性疾病；或其中所述(D)-2-羥基戊二酸相關(guān)的疾病是戊二酸尿癥。

4.權(quán)利要求3的用途，其中所述彌散性神經(jīng)膠質(zhì)瘤是WHO II級星形細(xì)胞瘤(AII)、WHO III級星形細(xì)胞瘤(AIII)、WHO II級少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤(OII)、WHO III級少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤(OIII)、WHO II級少突星形細(xì)胞瘤(OAII)、WHO III級少突星形細(xì)胞瘤(OAIII)、或繼發(fā)性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤。

5.試劑混合物在制造用于診斷對象中異檸檬酸脫氫酶(IDH)基因中或(D)-2-羥基戊二酸(D2HG)脫氫酶基因中的突變的方法的試劑盒中的用途，所述方法包括:

a)將所述對象的樣品與試劑混合物接觸，其中所述試劑混合物包含：

(i)溶劑,

(ii)具有氧化態(tài)和還原態(tài)的染料,其中還原態(tài)能夠與氧化態(tài)區(qū)分并且其中染料初始以氧化態(tài)存在,

(iii)電子轉(zhuǎn)移劑,

(iv)(D)-2-羥基戊二酸脫氫酶,和

(v)輔因子；和

b)通過測量染料的還原態(tài)的生產(chǎn)檢測(D)-2-羥基戊二酸，其中在對象的樣品中存在(D)-2-羥基戊二酸提示在所述對象的異檸檬酸脫氫酶(IDH)基因中或在(D)-2-羥基戊二酸脫氫酶基因中的突變。

6.權(quán)利要求5的用途，其中所述異檸檬酸脫氫酶(IDH)基因中的突變是IDH1基因或IDH2基因中的突變。

7.權(quán)利要求1、2或5中任一項的用途，其中在步驟a)中能夠熒光測定地區(qū)分染料的還原態(tài)與染料的氧化態(tài)并且其中在步驟b)中經(jīng)過熒光光譜學(xué)測量染料的還原態(tài)的產(chǎn)生。

8.權(quán)利要求1、2或5中的任一項的用途，其中在步驟a)中能夠比色地區(qū)分染料的還原態(tài)與染料的氧化態(tài)并且其中在步驟b)中經(jīng)過可見光譜學(xué)測量染料的還原態(tài)的產(chǎn)生。

9.權(quán)利要求1、2或5中的任一項的用途，其中在步驟a)中染料是刃天青或四唑鹽。

10.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中在步驟a)中染料是XTT(2,3-雙-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-2H-四唑-5-羧基苯胺,二鈉鹽)。

11.權(quán)利要求1、2或5中的任一項的用途，其中在步驟a)中電子轉(zhuǎn)移劑是心肌黃酶或PMS(N-甲基二苯并吡嗪甲基硫酸鹽)或麥爾多拉藍(lán)。

12.權(quán)利要求1、2或5中的任一項的用途，其中在步驟a)中輔因子是NAD+或NADP+。

13.權(quán)利要求12的用途，其中在步驟a)中酶是哺乳動物或原核生物(D)-2-羥基戊二酸脫氫酶。

14.權(quán)利要求13的用途，其中(D)-2-羥基戊二酸脫氫酶來自發(fā)酵氨基酸球菌(Acidaminococcus fermentans)。