[發(fā)明專利]細胞和其它復(fù)雜生物材料的色譜分離

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380010911.6
• 申請日: 2013-02-25
• 公開（公告）號: CN104254780B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: H·施塔德勒
• 申請（專利權(quán)）人: 朱諾治療有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11382
• 代理人: 曹津燕,張偉

1.一種分離靶細胞的方法，其中所述靶細胞在所述靶細胞表面上具有受體分子，所述方法包括：

-提供樣品，所述樣品包含所述靶細胞，

-提供受體結(jié)合試劑，所述受體結(jié)合試劑包含結(jié)合位點B和結(jié)合配偶體C，

其中，包含在所述受體結(jié)合試劑中的結(jié)合位點B能夠特異性結(jié)合到所述靶細胞表面上的受體分子，其中，經(jīng)由所述結(jié)合位點B的受體結(jié)合試劑和受體分子之間的結(jié)合的離解常數(shù)(K_D)具有低親和性，或其中經(jīng)由所述結(jié)合位點B的受體結(jié)合試劑和受體分子之間的結(jié)合的離解速率常數(shù)(koff)具有約3×10^-5sec^-1或更大的值，其中包含在所述受體結(jié)合試劑中的結(jié)合配偶體C能夠可逆地結(jié)合到親和試劑的結(jié)合位點Z，和

-使所述樣品在合適的固定相上進行色譜，所述固定相具有固定于其上的所述親和試劑，

其中所述親和試劑包含結(jié)合位點Z，其中所述結(jié)合位點Z與包含在所述受體結(jié)合試劑中的結(jié)合配偶體C形成可逆的鍵，且其中所述受體結(jié)合試劑的結(jié)合位點B結(jié)合到所述靶細胞表面上的受體分子，由此使所述靶細胞可逆地固定在所述固定相上。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述親和試劑包含兩個或更多個結(jié)合位點Z，所述結(jié)合位點Z能夠可逆地結(jié)合到包含在所述受體結(jié)合試劑中的結(jié)合配偶體C。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其進一步包括將競爭試劑負載到所述固定相上，其中，所述競爭試劑能夠破壞所述受體結(jié)合試劑的結(jié)合配偶體C與所述親和試劑的結(jié)合位點Z的結(jié)合，由此替換所述受體結(jié)合試劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述競爭試劑能夠競爭性地結(jié)合到所述親和試劑的結(jié)合位點Z。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法，其中在將包含所述靶細胞的樣品施用到所述固定相之前，使所述受體結(jié)合試劑固定在所述固定相上。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述樣品包含靶細胞和其他細胞的混合物，其中所述其他細胞在其細胞表面上缺乏所述受體分子，且其中所述方法包括從所述其他細胞中分離所述靶細胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的方法，其中所述受體結(jié)合試劑和所述受體分子之間的低親和力相互作用具有在約10^-3至約10^-7M范圍內(nèi)的K_D。

8.一種分離靶細胞的方法，其中所述靶細胞在所述靶細胞表面上具有受體分子，所述方法包括：

-提供樣品，所述樣品包含所述靶細胞和受體結(jié)合試劑，

所述受體結(jié)合試劑包含結(jié)合位點B和結(jié)合配偶體C，

其中，包含在所述受體結(jié)合試劑中的結(jié)合位點B能夠特異性結(jié)合到所述受體分子，且

-使所述樣品在合適的固定相上進行色譜，所述固定相為凝膠過濾基質(zhì)和/或親和色譜基質(zhì)，其中所述凝膠過濾基質(zhì)和/或親和色譜基質(zhì)包含親和試劑，其中所述親和試劑包含特異性結(jié)合到包含在所述受體結(jié)合試劑中的結(jié)合配偶體C的結(jié)合位點Z，由此分離所述靶細胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項所述的方法，其中所述色譜是柱色譜或平面色譜。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中使所述樣品進行色譜包括允許包含在所述受體結(jié)合試劑中的結(jié)合配偶體C與與其特異性結(jié)合的所述固定相的親和試劑的結(jié)合位點Z形成復(fù)合物，由此使所述受體結(jié)合試劑固定到所述固定相上。

11.根據(jù)權(quán)利要求8或10所述的方法，其中包含在所述受體結(jié)合試劑中的結(jié)合配偶體C能夠特異性結(jié)合到所述親和試劑的結(jié)合位點Z，其中所述親和試劑包含兩個或更多個能夠特異性結(jié)合到包含在所述受體結(jié)合試劑中的結(jié)合配偶體C的結(jié)合位點Z。

12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的方法，其中所述親和色譜基質(zhì)和/或所述凝膠過濾基質(zhì)具有共價固定于其上的所述親和試劑。

13.根據(jù)權(quán)利要求8至12中任一項所述的方法，其中所述樣品進一步包含競爭試劑，其中所述競爭試劑結(jié)合到親和試劑的結(jié)合位點Z，所述結(jié)合位點Z特異性結(jié)合到包含在所述受體結(jié)合試劑中的結(jié)合配偶體C，由此使所述競爭試劑固定到所述固定相上。