[發(fā)明專利]以計算方式優(yōu)化的人和禽H5N1流感的廣泛反應(yīng)性抗原

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380009263.2
• 申請日: 2013-02-08
• 公開（公告）號: CN104144941B
• 公開（公告）日: 2017-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: T·M·羅斯;C·J·克里瓦爾;B·M·吉爾斯
• 申請（專利權(quán)）人: 高等教育聯(lián)邦系統(tǒng)-匹茲堡大學
• 主分類號: C07K14/11
• 分類號: C07K14/11;A61K39/145;A61P31/16;C12N15/44;C12N15/63
• 代理公司: 北京北翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11285
• 代理人: 孫占華,張廣育

相關(guān)申請的交叉引用

本申請要求于2012年2月13日提交的美國臨時申請No.61/597,998的優(yōu)先權(quán)，所述臨時申請以引用的方式全文納入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開內(nèi)容涉及可引起針對人和禽H5N1流感病毒的廣泛反應(yīng)性的免疫應(yīng)答的優(yōu)化的流感血凝素蛋白及其作為疫苗的用途。

背景技術(shù)

流感病毒是正粘病毒科(Orthomyxoviridae)家族的成員。有三個亞型的流感病毒，命名為A型流感、B型流感和C型流感。所述流感病毒粒體含有分段的負義(negative sense)RNA基因組，所述基因組編碼以下蛋白：血凝素(HA)、神經(jīng)氨酸酶(NA)、基質(zhì)(M1)、質(zhì)子離子通道蛋白(M2)、核蛋白(NP)、聚合酶堿性蛋白1(PB1)、聚合酶堿性蛋白2(PB2)、聚合酶酸性蛋白(PA)和非結(jié)構(gòu)蛋白2(NS2)。HA、NA、M1和M2為膜相關(guān)蛋白，而NP、PB1、PB2、PA和NS2為核衣殼相關(guān)蛋白。M1蛋白是流感顆粒中最豐富的蛋白質(zhì)。HA和NA蛋白是包膜糖蛋白，負責病毒吸附和病毒顆粒侵入細胞，并且是用于病毒中和及保護性免疫的主要免疫顯性表位的來源。HA和NA蛋白都被認為是預(yù)防性流感疫苗的最重要組分。

每年，季節(jié)性流感僅在美國就導致超過300,000例入院和36,000例死亡(Simonsen et al.,Lancet Infect Dis 7:658-66,2007)。2009年新型H1N1流感病毒的出現(xiàn)證明了新的流感大流行可如何快速地橫掃全球。

目前在美國有兩種獲得批準的流感疫苗方法——滅活的裂解疫苗和減毒活病毒疫苗。滅活疫苗可有效地誘導體液免疫應(yīng)答，但通常只有弱的細胞免疫應(yīng)答。活病毒疫苗不能給予免疫妥協(xié)的或懷孕的患者，因為這些患者具有增加的感染風險。因此，存在對廣泛保護性的流感病毒疫苗的需求。

發(fā)明內(nèi)容

本文公開了用于引起針對H5N1流感病毒的廣泛反應(yīng)性免疫應(yīng)答的以計算方式優(yōu)化的H5N1HA多肽的產(chǎn)生?；?989個人和禽H5N1流感分離株，通過一系列的HA蛋白比對和隨后的共有序列產(chǎn)生，開發(fā)了所述優(yōu)化的HA多肽。

本文提供了用于引起針對H5N1流感的廣泛反應(yīng)性免疫應(yīng)答的具有優(yōu)化的氨基酸序列的重組流感HA多肽。在一些實施方案中，所述HA多肽包含與SEQ ID NO:1至少99.8％相同或與SEQ ID NO:3至少99.6％相同的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述多肽的氨基酸序列包含：與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3相比不多于2個或不多于1個置換。在一些實施方案中，所述流感HA多肽沒有N-末端的甲硫氨酸殘基。

本公開內(nèi)容還提供了編碼所述重組HA多肽的分離的核酸分子和載體。在一些實施方案中，編碼所述重組HA多肽的核酸分子和載體包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的核苷酸序列。還提供了包含所述載體的分離的細胞。

還提供了包含本文公開的優(yōu)化的HA多肽的流感病毒樣顆粒(VLP)和融合蛋白。

還提供了包括在可藥用載體中的本文公開的優(yōu)化的流感HA多肽、融合蛋白或VLP的組合物。本公開內(nèi)容還提供了通過給予所公開的組合物、融合蛋白或VLP在受試者中引起針對流感病毒的免疫應(yīng)答的方法。

還提供了通過給予受試者包含含有優(yōu)化的HA多肽的VLP的組合物而使所述受試者對流感病毒免疫的方法。

根據(jù)以下參照附圖進行的詳細描述，本發(fā)明的上述和其他目的、特征和優(yōu)點會變得更加清楚。

附圖說明

圖1的示意圖概述了使用1989個人和禽H5N1流感病毒分離株來產(chǎn)生COBRA HA序列的方法，在本文中稱為“所有H5COBRA”HA。

圖2的示意圖概述了使用1213個人和禽H5N1進化枝2分離株來產(chǎn)生COBRA HA序列的方法，在本文中稱為“人-禽COBRA-2”HA。

圖3的圖示出了用含有所有H5COBRA HA序列(SEQ ID NO:1)的VLP、含有人-禽COBRA-2HA序列(SEQ ID NO:3)的VLP、含有人進化枝2流感病毒COBRA HA序列(人COBRA-2)的VLP或含有大天鵝(A/Whooper Swan/Mongolia/244/2005)流感病毒HA的VLP接種小鼠后，針對進化枝1、進化枝2和進化枝7攻擊毒株的HAI滴度。在第0周時和第3周時在使用佐劑(Imject^TM)的情況下進行疫苗接種(3μg)。