[發明專利]用于檢測多特異性結合物的結合搭檔的方法

有效

• 申請號: 201380007278.5
• 申請日: 2013-01-29
• 公開（公告）號: CN104105966B
• 公開（公告）日: 2016-10-26
• 發明（設計）人: K-G·施圖本拉赫;U·韋塞爾斯
• 申請（專利權）人: 弗·哈夫曼-拉羅切有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 史文靜;黃革生

1.用于確定樣品中的雙特異性抗體的抗原的存在和/或量的方法，其中待檢測的抗原可以被雙特異性抗體的第一結合特異性特異的結合，從而使抗原與雙特異性抗體復合(抗原-雙特異性抗體-復合物)，包括步驟：

-孵育包含抗原和雙特異性抗體的樣品與抗獨特型抗體，所述抗獨特型抗體特異的結合雙特異性抗體的不同于第一結合特異性的第二結合特異性，其中抗獨特型抗體被固相結合。

2.根據權利要求1的方法，其特征是方法包括步驟：

-孵育包含抗原和雙特異性抗體的樣品與抗獨特型抗體，所述抗獨特型抗體特異的結合雙特異性抗體的不同于第一結合特異性的第二結合特異性，其中抗獨特型抗體被固相結合，和

-檢測抗原-雙特異性抗體-抗獨特型抗體的復合物，從而確定雙特異性抗體的抗原的存在和/或量。

3.根據權利要求1-2的任一項的方法，其特征是方法包括步驟：

-孵育包含抗原和雙特異性抗體的樣品與抗獨特型抗體，所述抗獨特型抗體特異的結合雙特異性抗體的不同于第一結合特異性的第二結合特異性，其中抗獨特型抗體被固相結合，和

-孵育在第一步中形成的復合物與在不同于雙特異性抗體所結合表位的表位上特異的結合抗原的抗體，從而確定樣品中的雙特異性抗體的抗原的存在和/或量。

4.根據權利要求1至3的任一項的方法，其特征是方法是用于確定與雙特異性抗體復合的雙特異性抗體的抗原的存在和/或量。

5.根據權利要求1至4的任一項的方法，其特征是方法包括下列步驟：

-提供包含抗原和雙特異性抗體的樣品，其中至少90％的抗原被雙特異性抗體復合，

-孵育包含抗原和雙特異性抗體的樣品與抗獨特型抗體，所述抗獨特型抗體特異的結合雙特異性抗體的不同于第一結合特異性的第二結合特異性，其中抗獨特型抗體被固相結合，和

-孵育在第一步中形成的復合物與在不同于雙特異性抗體所結合表位的表位上特異的結合抗原的抗體，從而確定樣品中的雙特異性抗體的抗原的存在和/或量。

6.根據權利要求1至4的任一項的方法，其特征是方法包括下列步驟：

-孵育包含抗原和雙特異性抗體的樣品與一定量的雙特異性抗體，以提供其中至少90％的抗原被雙特異性抗體復合的樣品，

-孵育包含被雙特異性抗體復合的抗原的樣品與抗獨特型抗體，所述抗獨特型抗體特異的結合雙特異性抗體的不同于第一結合特異性的第二結合特異性，其中抗獨特型抗體被固相結合，和

-孵育在前步中形成的復合物與在不同于雙特異性抗體所結合表位的表位上特異的結合抗原的抗體，從而確定樣品中的雙特異性抗體的抗原的存在和/或量。

7.根據權利要求6的方法，其特征是雙特異性抗體的量在1μg/ml至10μg/ml樣品之間。

8.根據權利要求6-7的任一項的方法，其特征是至少95％的抗原被雙特異性抗體復合。

9.根據權利要求8的方法，其特征是至少98％的抗原被雙特異性抗體復合。

10.用于確定樣品中的雙特異性抗體的結合抗體的抗原的量的方法，其中抗原可以被雙特異性抗體的第一結合特異性特異的結合，包括步驟：

-孵育第一等份的包含抗原和雙特異性抗體的樣品與一定量的雙特異性抗體，以提供其中至少90％的抗原被雙特異性抗體復合的樣品，

-孵育包含被雙特異性抗體復合的抗原的樣品與抗獨特型抗體，所述抗獨特型抗體特異的結合雙特異性抗體的不同于第一結合特異性的第二結合特異性，其中抗獨特型抗體被固相結合，和

-孵育在前步中形成的復合物與在不同于雙特異性抗體所結合表位的表位上特異的結合抗原的抗體，從而確定樣品中的雙特異性抗體的抗原的存在和/或量，和確定樣品中存在的抗原總量，

-孵育第二等份的包含抗原和雙特異性抗體的樣品與抗獨特型抗體，所述抗獨特型抗體特異的結合雙特異性抗體的不同于第一結合特異性的第二結合特異性，其中抗獨特型抗體被固相結合，和

-孵育形成的復合物與在不同于雙特異性抗體所結合表位的表位上特異的結合抗原的抗體，從而確定樣品中存在的雙特異性抗體的游離抗原的量，和

-通過在樣品中存在的抗原總量與樣品中存在的游離抗原的量之間的差異，確定雙特異性抗體的結合抗體的抗原的量。