[發明專利]用于改進核酸合成反應的方法

有效

• 申請號: 201380007277.0
• 申請日: 2013-01-24
• 公開（公告）號: CN104093835A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 松村清之;上森隆司;向井博之
• 申請（專利權）人: 寶生物工程株式會社
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12Q1/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李慧惠;梁謀

技術領域

本發明涉及用于改進核酸合成反應的反應性的方法、用于核酸合成反應的組合物，和用于核酸合成反應的反應緩沖液。

背景技術

核酸合成方法，特別是聚合酶鏈反應（PCR）方法是用于在試管中簡單擴增目的核酸片段的技術，并且近來不僅成為用于遺傳研究的重要實驗手段，還成為了生物、醫學和農業廣泛領域中的重要實驗手段。

使用DNA聚合酶的核酸合成反應，如PCR在其反應性如特異性方面經常有問題。為了避免非特異性的核酸合成反應，嘗試開發新型DNA聚合酶、改進引物設計方法、優化反應溶液組成、添加化合物等。例如，發現添加甜菜堿在擴增富含CG的模板中有效（非專利參考文獻1和2）。

引用列表

非專利參考文獻

非專利參考文獻1:????American?Journal?of?Human?Genetics,?1994年9月1日,?第55卷,?附錄第3號,?第A238頁

非專利參考文獻2:????Nucleic?Acids?Research,?1997年10月1日,?第25卷,?第19號,?第3957-3958頁。

發明概述

本發明待解決的問題

已經嘗試改進核酸合成反應的反應性。然而，核酸合成反應可能仍然伴隨有非特異性反應或可能不能合成足夠量的DNA。由于這些原因，需要核酸合成反應的反應性中的進一步改進。本發明的目標是提供用于改進核酸合成反應的反應性的方法、用于核酸合成反應的組合物、和用于核酸合成反應的反應緩沖液。

問題的解決方案

本發明人發現可以通過向反應溶液添加ω-氨基酸來改進核酸合成反應的反應性。因此，完成本發明。

即，本發明涉及：

[1]?用于改進核酸合成反應的反應性的方法，其包括向反應溶液添加ω-氨基酸的步驟；

[2]?根據[1]的方法，其中所述ω-氨基酸是下式1代表的化合物：

[化學式1]

其中n是2或更大的整數；

[3]?根據[2]的方法，其中n是2到7的整數；

[4]?根據[1]的方法，其中所述核酸合成反應是聚合酶鏈反應；

[5]?根據[1]的方法，其包括制備反應溶液的步驟，所述反應溶液含有ω-氨基酸、DNA聚合酶、至少一條引物和至少一種脫氧核糖核苷酸三磷酸；

[6]?根據[1]的方法，其進一步包括向所述反應溶液中添加甜菜堿的步驟；

[7]?用于核酸合成反應的組合物，其含有：DNA聚合酶、反應緩沖劑、至少一條引物和至少一種脫氧核糖核苷酸三磷酸和ω-氨基酸；

[8]?根據[7]的組合物，其中所述ω-氨基酸是由如[2]中定義的式1代表的化合物；

[9]?根據[7]的組合物，其進一步含有甜菜堿；

[10]?用于核酸合成反應的反應緩沖液，其含有ω-氨基酸；

[11]?根據[10]的反應緩沖液，其中所述ω-氨基酸是由如[2]中定義的式1代表的化合物；

[12]?根據[10]的反應緩沖液，其進一步含有甜菜堿；

[13]?用于核酸合成反應的試劑盒，其包含以下組分：

DNA聚合酶，

反應緩沖劑，

至少一種脫氧核糖核苷酸三磷酸，和

ω-氨基酸；

[14]?根據[13]的試劑盒，其中所述ω-氨基酸是由如[2]中定義的式1代表的化合物；

[15]?根據[13]的試劑盒，其進一步包含甜菜堿。

發明效果

根據本發明，提供了用于改進核酸合成反應的反應性的方法、用于核酸合成反應（其具有極佳的反應性）的組合物、和用于核酸合成反應的反應緩沖液。

附圖簡述

[圖1]?圖1顯示了實施例1中瓊脂糖凝膠電泳的結果。

[圖2]?圖2顯示了實施例2中瓊脂糖凝膠電泳的結果。

[圖3]?圖3顯示了實施例3中瓊脂糖凝膠電泳的結果。

[圖4]?圖4顯示了實施例4中瓊脂糖凝膠電泳的結果。

[圖5]?圖5顯示了實施例5中瓊脂糖凝膠電泳的結果。

實施本發明的方式