[發明專利]用于調節血管生成和血管發生的方法和組合物

在審

• 申請號: 201380006611.0
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN104254337A
• 公開（公告）日: 2014-12-31
• 發明（設計）人: M·道;C·泰特;C·凱斯
• 申請（專利權）人: 桑比歐公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;C12N5/071
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李程達

相關申請的交叉參考

本申請要求2012年1月27日提交的美國臨時專利申請號61/591,486、2012年4月24日提交的美國臨時專利申請號61/637,740和2012年10月4日提交的美國臨時專利申請號61/709,619的利益；為了所有目的將所述美國臨時專利申請的說明書和附圖通過引用整體并入本文。

關于聯邦政府資助的聲明

不適用的。

領域

本公開內容在血管生成和血管發生的領域內；例如用于治療缺血性事件例如中風。其也在干細胞和通過基因操作從干細胞衍生的細胞的領域內。

背景

在穩定的中風中，恢復血管流量是恢復腦的營養物供應所必需的。為了修復長期缺血后血管損傷，需要至少兩個連續步驟。第一步驟是內皮細胞(EC)的芽生式血管生成；該過程必需內皮細胞的初始增殖和周圍細胞外基質的重塑。VEGF-介導的EC的增殖和基質金屬蛋白酶屬于血管生成性萌芽的主要組成部分。第二步驟是血管穩定化，該過程依賴于血管平滑肌細胞的募集以包圍新生成的血管。單核細胞和周細胞也參與血管穩定化，其產生適當的動脈生成因子(arteriogenic?factor)和細胞外基質蛋白。在利用平滑肌細胞和周細胞的血管穩定化不存在的情況下，可發生新生血管的退化。

已顯示骨髓基質細胞(MSC，也稱為間充質干細胞))在腦動脈閉塞和創傷性腦損傷后促進血管再生(revascularization)(參見Omori等人(2008)Brain?Res.1236:30-38；Onda等人(2008)J.Cereb.Blood?Flow?Metab.28:329-340；Pavlichenko等人(2008)Brain?Res.1233:203-213；Xiong等人(2009)Brain?Res.1263:183-191)。SB623細胞是通過用包含編碼Notch細胞內結構域(NICD)的序列的載體轉染骨髓基質細胞獲得的骨髓基質細胞的衍生物(參見例如，美國專利號7,682,825和Dezawa等人(2004)J.Clin.Investig.13:1701-1710)。SB623細胞引發實驗性中風模型中的功能改善(參見，例如，美國專利號8,092,792和Yasuhara等人(2009)Stem?Cells?and?Development?18:1501-1514)。雖然SB623細胞的分泌蛋白質組與親代MSC的分泌蛋白質組是相當的；但已觀察到相較于SB623細胞，MSC分泌不同水平的特定營養因子(參見，例如，Tate等人(2010)Cell?Transplantation?19:973-984；美國專利申請公布號2010/0266554。此外，已報導許多其表達水平在MSC與SB623細胞之間相異的因子參與血管再生。

因為中風是美國成人失能的首要原因，是世界范圍內死亡的第二大原因，因此仍然存在治療的需要以恢復對中風誘發的腦的缺血性損傷的區域的血液供應和促進該區域的再灌注。

概述

本發明人已發現利用編碼Notch細胞內結構域的序列轉染的間充質干細胞的后代(即，SB623細胞)具有令人驚訝的能夠合成和分泌促進血管生成的因子的性質。因為血管生成即新血管的形成是在腦損傷和疾病中內源性修復過程的至關重要的部分，所以該發現提供了新的用于治療血管障礙例如中風的方法。

因此，本公開內容除其它以外提供了：

1.一種用于增強受試者的血管生成的方法，所述方法包括給所述受試者施用SB623細胞的群體；其中所述SB623細胞通過如下步驟獲得：(a)提供間充質干細胞的培養物，(b)將步驟(a)的細胞培養物與包含編碼Notch細胞內結構域(NICD)的序列的多核苷酸接觸，其中所述多核苷酸不編碼全長Notch蛋白，(c)選擇包含步驟(b)的多核苷酸的細胞，和(d)在選擇不存在的情況下進一步培養步驟(c)的選擇的細胞。

2.實施方案1的方法，其中血管生成的增強在中樞神經系統中發生。

3.實施方案2的方法，其中血管生成的增強在腦中發生。

4.一種用于修復受試者的缺血性損傷的方法，所述方法包括給所述受試者施用SB623細胞的群體；其中所述SB623細胞通過如下步驟獲得：(a)提供間充質干細胞的培養物，(b)將步驟(a)的細胞培養物與包含編碼Notch細胞內結構域(NICD)的序列的多核苷酸接觸，其中所述多核苷酸不編碼全長Notch蛋白，(c)選擇包含步驟(b)的多核苷酸的細胞，和(d)在選擇不存在的情況下進一步培養步驟(c)的選擇的細胞。