[發明專利]賦予酵母對乙醇和高溫的耐受性的基因

有效

• 申請號: 201380004910.0
• 申請日: 2013-01-11
• 公開（公告）號: CN104428418B
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 查爾斯·阿巴斯;安德烈·A·希博尼;安德烈·Y·沃羅諾夫斯基;奧萊納·P·伊修克
• 申請（專利權）人: 阿徹丹尼爾斯米德蘭德公司
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/81;C12P7/06
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 高瑜;鄭霞

描述與了鑒定賦予酵母乙醇耐受性的基因的方法、賦予乙醇耐受性的基因、以及用于鑒定這些基因的突變株。此處特指為HpETT1的基因是從多形漢遜酵母中分離的。在特指為7E的乙醇敏感突變體多形漢遜酵母菌株中HpETT1的表達互補了該突變體的乙醇敏感性。當該HpETT1的多個拷貝被整合到該基因組中并過量表達時，被轉化的菌株表現了大約10倍更大的對乙醇的耐受性和對蛋白錯誤折疊劑AZC的耐受性。HpETT1的表達還增加了釀酒酵母中的乙醇耐受性。HpEtt1與來自釀酒酵母表示為MPE1的一種先前鑒定的蛋白具有39％序列一致性，然而，該MPE1基因不會賦予對該7E突變體的乙醇耐受性。鑒定了另一種來自樹干畢赤酵母的基因，該基因此處被指定為PsETT1，它編碼一種與HpETT1具有37％一致性的直系同源蛋白，并且還賦予對該7E突變體的乙醇耐受性。

相關申請的交叉引用

本發明要求于2012年1月12日提交的美國臨時申請號61/585,873和61/585,917的優先權。

技術領域

本披露涉及賦予用以通過發酵生產乙醇的酵母乙醇耐受性的基因，具體涉及多形漢遜酵母的木糖發酵菌株的增加的乙醇耐受性，涉及有用于鑒定乙醇耐受基因的多形漢遜酵母的乙醇敏感突變體，涉及多形漢遜酵母的乙醇耐受重組體，并且更具體地涉及此處分別指定為HpETT1和PsETT1的來自多形漢遜酵母和樹干畢赤酵母的基因序列，HpETT1和PsETT1與釀酒酵母的MPE1基因在序列上相似但賦予酵母(包括多形漢遜酵母和釀酒酵母)增加的乙醇耐受性。

背景

在該背景部分和后面的說明中引用的參考文獻是為了提供對下文所述的發明的更好的理解，作為材料和方法的來源(它們會進一步使人員能夠實踐這些方法和/或獲得下文所述的組合物)，以及作為這類方法的縮略。因此，通過引用來結合此處引用的每個參考文獻以達到這樣的程度，這些參考文獻為幫助制備和使用后面所要求保護的發明提供教導。如果在此處提供的披露和參考文獻中有任何沖突，本披露將引用的參考文獻的教導控制在它們沖突的程度內。此處任何參考文獻的引用并非承認這樣的文獻與下文所要求保護的發明有關或是其現有技術。

多形漢遜酵母是具有工業和科學重要性的一種酵母種類。這種非常規的耐熱親甲烷性酵母是用于生產異源蛋白的最好的酵母系統之一(蓋利森(Gellissen)，2000；蓋利森(Gellissen)編輯.2002；蘇科(Suckow)和蓋利森(Gellissen)，2002)，它充當研究過氧化物酶體功能(范德克萊恩(Van der Klei)和維恩威斯(Veenhuis)，2002)、甲醇代謝、硝酸鹽同化(西維里奧(Siverio)，2002)以及應激反應(烏比沃夫克(Ubiyvovk)等人，2006)的一個模型。多形漢遜酵母還具有在通過木質纖維素碳源發酵生產生物燃料中有用的潛力，因為它能夠發酵木糖(瑞奧博弗(Ryabova)等人，2003)并且是最耐熱的酵母種類中的一種(格拉(Guerra)等人，2005)。然而，多形漢遜酵母作為通過發酵生產乙醇的一種有機體是受限的，因為與其他酵母(例如釀酒酵母)相比它的生長對乙醇相當敏感。

概述