[發明專利]單核細胞增殖劑、單核細胞增殖用培養基、單核細胞的制造方法、樹突狀細胞的制造方法、及樹突狀細胞疫苗的制造方法

有效

• 申請號: 201380001273.1
• 申請日: 2013-02-08
• 公開（公告）號: CN103597072B
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 阿部博幸;川崎廣明
• 申請（專利權）人: 醫療法人社團博心厚生會;免疫遺傳學株式會社
• 主分類號: C12N5/0784
• 分類號: C12N5/0784;A61K39/00;A61P35/00;C12N5/0786
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 楊宏軍;王大方

本發明提供能高效且簡便地使單核細胞增殖的手段。本發明提供了一種在從單核細胞到樹突狀細胞的分化處理前使用的單核細胞增殖劑，其含有Flt?3L、IL?3或IFN?γ中的一種以上。另外本發明還提供了在從單核細胞到樹突狀細胞的分化處理前使用的單核細胞增殖用培養基，其含有Flt?3L、IL?3或IFN?γ中的一種以上。本發明的單核細胞增殖用培養基也可含有GM?CSF。

技術領域

本發明涉及單核細胞增殖劑、單核細胞增殖用培養基、單核細胞的制造方法、樹突狀細胞的制造方法、及樹突狀細胞疫苗的制造方法。

背景技術

近年來，在癌癥的治療中，關注于樹突狀細胞疫苗的使用。樹突狀細胞疫苗是由向樹突狀細胞（來自于給予疫苗的對象（例如癌癥患者））中引入了（脈沖了）癌抗原的樹突狀細胞制備的，其被給予至疫苗給予對象的體內。給予的樹突狀細胞將癌抗原提呈至T細胞，提呈了抗原的T細胞（CTL）特異性攻擊癌細胞，因此能在不損傷體內正常細胞的情況下治療癌癥。

但是，制造樹突狀細胞疫苗所必需的樹突狀細胞無法從體內直接分離。因此，從由給予疫苗的對象采集的血液中分離單核細胞，將該單核細胞分化為樹突狀細胞，由此來獲得樹突狀細胞。

作為以往已知的為制造樹突狀細胞疫苗而使用的單核細胞的采集方法，已知有使用成分采血裝置分離血液中的白細胞的方法（下文中將該方法稱為“血采集術（apheresis）”）。但是，血采集術不僅裝置運用花費高，而且還要求高技術來進行裝置的操作。另外，使用血采集術采集的是不僅含有單核細胞、還含有除單核細胞以外的成分（白細胞、紅細胞、血小板等）的混合物。因此，為除去紅細胞、血小板等除單核細胞以外的成分，血采集術之后一般還要進行單核細胞的分離步驟。

樹突狀細胞疫苗的臨床應用中，優選在一次給予中使用大約1×10⁷個的細胞數。為了確保這樣的細胞數，通常，隔開間隔從同一對象進行8次左右血采集術。另外，因為血液中存在的單核細胞的比例較低，為了獲得能制造樹突狀細胞疫苗的充分的量的單核細胞而使用血采集術時，必須要使得血液在血采集術裝置內循環并充分采集白細胞成分，這會對患者在體力上或時間上造成非常大的負擔。因此，存在下述情況：在血采集術中，患者狀態突然變化時，血采集術中途中斷，因此不得不放棄樹突狀細胞疫苗療法。另外，在通過血采集術采集單核細胞的成分的情況下，雖然通常能制作大約5～8次分量的樹突狀細胞疫苗，但得到的樹突狀細胞疫苗的實際量根據患者的血液狀態等而變動。

另外，從胳膊等采集末梢血等以往的采血方法中，雖然患者負擔較輕，但存在下述缺點：即使根據以往的方法使得到的單核細胞直接分化為樹突狀細胞，也無法獲得足量的細胞數。因此，為了由從末梢血的采血得到的單核細胞制造細胞數充足的樹突狀細胞疫苗，在該過程中使單核細胞增殖是一個課題，克服其的技術是人們所期望的。另外，這樣的技術中，考慮到樹突狀細胞疫苗的給予間隔的情況下，關于樹突狀細胞疫苗的制造時間，更期望能以2周左右進行制造。

因此，為了解決上述課題，考慮在體外使從血液分離的單核細胞增殖。作為這樣的方法，專利文獻1中公開了在抑制單核細胞中特定物質的表達的狀態下培養單核細胞。但是，該方法需要重組體的制造步驟以及長期的培養時間。

專利文獻1：日本特表2010-515442號公報

發明內容

本發明的目的是提供能高效且簡便地使單核細胞增殖的手段。

本發明的發明人等發現，參與造血干細胞的增殖等的特定細胞因子能高效增殖單核細胞，由此完成了本發明。具體而言，本發明提供了下述內容。

（1）一種在從單核細胞到樹突狀細胞的分化處理前使用的單核細胞增殖劑，所述單核細胞增殖劑含有Flt-3L、IL-3或IFN-γ中的一種以上。

（2）一種在從單核細胞到樹突狀細胞的分化處理前使用的單核細胞增殖用培養基，所述培養基含有Flt-3L、IL-3或IFN-γ中的一種以上。