[實用新型]一種流式細胞術用紅細胞裂解試劑盒

有效

• 申請號: 201320733936.6
• 申請日: 2013-11-19
• 公開（公告）號: CN203587414U
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 趙侃;王春有;劉湘連;甘朝;李莉莉
• 申請（專利權）人: 北京東方華輝生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 姚亮

技術領域

本實用新型涉及一種流式細胞術用紅細胞裂解試劑盒，屬于生物材料技術領域。

背景技術

流式細胞術（Flow?Cytometry?Method,FCM）在免疫功能評價、血液腫瘤的診斷與分型、治療方案選擇與預后判斷、藥物敏感性篩選和發病機理研究等方面都發揮著重要作用；特別是干細胞研究及臨床應用中，FCM檢測與監測CD34+細胞群比例是最為常規和必需的技術手段。FCM技術在為實驗室和臨床提供重要參數的同時，其自身作為檢測方法的準確性，特別是其在診斷應用中的質量控制成為了關鍵環節。衛生部臨床檢驗中心專家在《分子診斷質量控制面臨的問題》（胡麗濤等,臨床檢驗雜志,2012,30(6):466-467.）一文中詳細闡釋了這一問題。此外，美國病理學家學會（College?of?American?Pathologists,CAP）作為診斷檢驗的權威機構，制定了一整套較為完整的檢測技術質量控制程序指南和實驗室質量監控條例，該指南和條例從取材送材，到樣本前處理、上機等，對檢測所涉及技術的各個環節都作了詳細規定。

FCM檢測結果的準確性依賴于對實驗操作的過程實施全面質量控制，而分析樣本的制備則是其中非常重要的環節，也是最困難的環節之一。分析樣本制備的主要內容是樣本前處理。所謂樣本前處理，是指在實施FCM檢測之前，必須對生物樣本在體外進行適宜的前處理操作，這一操作是保證這些技術實施效果的關鍵性步驟，將對檢測結果的準確性產生較大影響。樣本前處理包含的概念十分廣泛，其中應用最為普遍的一項前處理方案是紅細胞去除。目前去除紅細胞的主要途徑是紅細胞裂解法、密度梯度離心法等。根據已發表文獻表明，使用后者執行這一步驟不僅費時費力，而且可能會丟失部分細胞，造成實驗誤差。而紅細胞裂解法由于其操作簡便，并能夠最大程度保持原始白細胞各項生物學參數和形態，目前應用最為廣泛。

紅細胞裂解需要使用紅細胞裂解試劑，而紅細胞裂解試劑的選擇，以及紅細胞裂解的實驗操作對檢測結果存在較大影響。選擇紅細胞裂解試劑品種的研究實例例如，鞏文玉等在研究骨髓移植前動員外周血CD34+細胞相對計數時發現，使用Becton?Dikinson公司的產品FACS?Lysing?Solution裂解處理后的粒細胞和淋巴細胞的FSC、SSC信號強度均弱于Beckman?Coulter公司的產品IOTest，且前者處理的標本CD45+細胞在所有收集的信號中的百分比要高于后者，這提示IOTest的裂解作用較為溫和，但其會導致紅細胞污染，IOTest的配方為氯化銨、碳酸氫鉀和乙二胺四乙酸；此外，該研究還發現裂解后所得總白細胞數與CD34+細胞數并不存在相關關系，這些現象均提示裂解試劑的配方對于預測輸注給受者的CD34+細胞量存在重大影響，主要原因在于CD34+細胞含量很低，其檢測結果可能對任何可能造成微小變異的因素均很敏感，特別是紅細胞裂解這一操作（鞏玉文等,紅細胞裂解液對CD34+細胞相對計數的影響,中國實驗血液學雜志,2010,18(3):762-765.）。

紅細胞裂解實驗操作對檢測結果影響的實例例如，ALDAGEN公司的干細胞檢測產品ALDEFLUOR說明書中明確提示使用氯化銨配方的紅細胞裂解試劑對外周血進行紅細胞裂解時需要執行兩次，以確保紅細胞被完全去除，不影響后續試驗；然而，本領域技術人員所熟知的是，執行兩次裂解及相應的洗滌，將會造成部分細胞丟失，進而造成實驗誤差，例如劉艷榮等（劉艷榮等，流式細胞術計數CD34陽性細胞標準化與質量控制，中國實驗血液雜志，2000，8(4):302-306）明確指出了這一問題，并提出樣本制備過程的這些差異將會影響CD34陽性細胞標準化檢測與質量控制。