[實用新型]全局調控因子IrrE、Csp及CarD蛋白的金標快速聯檢試劑盒

有效

• 申請號: 201320731951.7
• 申請日: 2013-11-19
• 公開（公告）號: CN203849263U
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 張維;谷偉;周正富;滕超;王金輝;陸偉;陳明;林敏
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

技術領域：

本實用新型涉及全局調控因子IrrE、Csp及CarD蛋白的金標快速聯檢試劑盒。

背景技術：

IrrE、Csp及CarD蛋白是在目前在轉基因生物的研究工作中，或在對轉基因產品進行篩選或安全性評價時，經常需要同時進行檢測的三種外源性基因。如果分別進行檢測，不但操作很繁瑣，而且檢測成本高。

IrrE蛋白是耐輻射球菌中的全局調控因子，將irrE基因導入大腸桿菌中能夠顯著增強其輻射抗性、氧化抗性和耐鹽能力。而且將該基因導入植物后，明顯提高了植物的耐鹽和抗旱能力。

CSP蛋白是一種冷脅迫應激蛋白，作為一種分子伴侶與單鏈核酸非特異性結合，具有穩定單鏈核苷酸二級結構的作用，使細胞在極端環境下存活下來。將冷激蛋白基因（csp）轉入植物后，賦予了植物較強的耐鹽及抗旱性能。目前，冷激蛋白CSP編碼基因已應用于多種轉基因植物的研究。

CarD蛋白是一類全局調控轉錄因子，在DNA復制、重組、修復以及基因轉錄等生物過程中發揮著重要的作用。UV輻射脅迫條件下全基因組轉錄組學分析發現CarD蛋白在UV輻射后被誘導，可能參與了DNA損傷修復過程的調控。在可自然轉化和易于遺傳操作的模式菌株D.radiodurans中，敲除了相應的CarD編碼基因，發現與野生型菌株相比在UV輻照、過氧化氫、乙醇以及饑餓脅迫下，其表型的存在明顯差異。

因此，實踐中很需要有一種可同時檢測轉基因植物中IrrE、Csp及CarD蛋白，且操作簡便、結果準確可靠、快速的裝置。

實用新型內容：

本實用新型的目的是建立一種操作簡便、結果準確可靠、快速，并能同時檢測3種不同轉基因成分的檢測試劑盒。

本實用新型的技術方案是這樣的：全局調控因子IrrE、Csp及CarD蛋白的金標快速聯檢試劑盒，由底板、上蓋組成；其特征為，所述試劑盒的形狀為三角形盒體，盒體的底板上設置有3條測試帶；上蓋有3個觀測窗和3個加樣孔。

所述3條測試帶分別位于所述三角形盒體底板表面的三邊；

所述3個加樣孔分別位于所述三角形盒體上蓋表面的三邊。

所述底板或上蓋可具有卡槽，以保證底板與上蓋扣緊。

所述觀測窗優選是長方形。

試劑盒的優選的形狀為扁平的三角形盒。

本實用新型的目的是這樣實現的：當底板蓋入上蓋后，每個觀測窗對應一條測試帶，通過盒蓋上的單一的加樣孔及3個觀測窗可進行加樣和觀察檢測結果，每個觀測窗可分別檢查一種基因。

在本實用新型的一個優選的實例中，以轉植物的CarD蛋白的檢測為例：

試劑盒為三角形扁盒，盒底板沿三角形的三條邊各設置有一條凹槽，可放置3條測試帶；上蓋與測試帶相應位置有3個觀測窗，3個加樣孔設置在上蓋三個頂角處（見圖1、圖2）。

3條測試帶以此種方式分布，一是加樣方便，可同時加樣以檢查3種基因，二是檢測結果互不受影響。

上述3條測試帶，一條用于檢測CarD蛋白，一條用于檢測IrrE蛋白，另一條用于檢測Csp蛋白。所述測試帶是一種具有檢測系統主體膜反應體系功能的檢測材料，由高分子纖維膜、塑料等多層材料制成。3種蛋白的測試帶均可分為質控區和檢測區，質控區可包被羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG多克隆抗體；CarD蛋白測試帶的樣品檢測區包被特異功能性CarD，IrrE蛋白測試帶的樣品檢測區包被IrrE，Csp蛋白測試帶的樣品檢測區包被特異功能性Csp的單克隆抗體或多克隆抗體。

每個觀測窗分為測試區（T）和質控區（C）兩部分，可在上蓋上用字母C、T標示出；

檢測時，將送檢物品的提取液分別滴加在試劑盒的加樣孔中，5－10分鐘后，通過肉眼就可以通過上蓋的觀測窗直接觀察到準確的檢測結果。

對于每個觀測窗來說，用以下方式判斷檢測結果：

1、陰性（-）：

反應狀況：觀測窗質控區（C）出現一條紫紅色條帶。

檢測結果：待檢樣品中不含待檢基因或其含量在其閾值以下。

2、陽性（+）：

反應狀況：觀測窗質控區（C）出現一條紫紅色條帶，在測試區（T）內同時出現紫紅色條帶。檢測結果：待檢基因含量在閾值以上。

3、無效：

反應狀況：質控區（C）未出現紫紅色條帶，

檢測結果：表明不正確的操作過程或試劑盒已變質損壞。