[實用新型]一種量子點標記的試條卡

有效

• 申請號: 201320716016.3
• 申請日: 2013-11-14
• 公開（公告）號: CN203759011U
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 馬義才;顧敏;馬靈
• 申請（專利權）人: 成都領御生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型屬于體外診斷領域，具體涉及一種自身帶有被檢物標準曲線或系數參數等檢測用信息、結合具有信號檢測功能的儀器能快速定量樣品單一組分或多組分濃度的量子點標記的試條卡。

背景技術

膠體金免疫層析技術（Gold-Immunochromatography Assay，GICA）現已廣泛應用于免疫檢測的各個方面，其以微孔濾膜為載體，利用微孔濾膜的毛細管作用，使滴加在膜條一端的液體樣品慢慢向微孔濾膜另一端滲移，若液體中有特異抗原或抗體，它們可以和免疫金結合后再與包被在微孔濾膜上的相應抗體或抗原結合而顯示免疫金顏色（紅色）。該技術簡單快速，幾分鐘就能用肉眼觀察結果。不足之處是：（1）只能定性檢測樣品，難能實現樣品定量。（2）難能做到樣品多組分同時檢測，檢測效率低。（3）對于某些抗原或抗體含量極低的樣本，膠體金顏色很淺很難用肉眼判斷結果，檢測靈敏度低。

實現樣品多組分快速定量檢測，一直是人們長期追求的目標。近年發展的納米量子點（quantum dots, QDs），具有獨特優良光學性質：熒光發光效率高，激發譜線范圍寬，能“一元激發，多元發射”，發射譜線范圍窄且對稱，光漂白速度慢，熒光壽命長，粒徑與生物分子相近，表面修飾后能多功能化，不同粒徑和種類的量子點混合物產生的特征波長熒光光譜不交疊，非常適于樣品多組分分析。Sweeny等將三種一抗分別與三種不同發射波長的量子點(λem=705nm，605nm和655nm)通過生物素-親和素的特異性結合形成抗體-量子點復合物，通過熒光成像實現了扁桃體中3種不同抗體的同時分析，證明應用多色量子點可在同一樣品中同時定位多種生物標志物。Nie等用4種不同發射波長的量子點標記4種抗體實現了對霍奇金淋巴瘤中病理標志性細胞HRS（Hodgkin’s and Reed-Sternberg）的成像檢測，提高了檢測靈敏度和特異性，有利于臨床快速準確地診斷霍奇金淋巴瘤。Kobayashi等和Chan等分別用兩種不同顏色的近紅外量子點成像分析小鼠的淋巴管流路和左右胸腔，證明了近紅外量子點的多重成像分析作用。利用量子點的熒光特性除了進行成像分析外還可以實現對多種病原體、毒素、抗原、抗體、酶、小分子物質以及離子等的定性定量分析。Zahavy等制備熒光探針QD585-IgGαB.anthracis和QD655-IgGαY.pestis，結合流式細胞儀實現了兩種致病菌的同時定量檢測，檢測限可達到10³cfu/mL。Goldman課題組用多色量子點實現了葡萄球菌產生的腸毒素B和2,4,6-三硝基甲苯以及霍亂毒素、蓖麻毒素、志賀毒素和葡萄球菌毒素四種毒素的同時檢測。除此之外，在微流體蛋白質芯片中用量子點作熒光標記，利用其熒光多色性能夠同時快速檢測腫瘤標志物癌胚抗原(CEA)和甲胎蛋白(AFP)，檢測限低至250fmol/L，比用有機熒光染料檢測高4個數量級。Giorgio等將血管內皮生長因子A（VEGF A）和血管生成素（angiopoietin）分別與不同發射波長的量子點構成熒光探針，通過抗原抗體特異性結合反應引起量子點的聚集，用流式細胞儀定量檢測特征熒光信號從而得到相應抗原的濃度，檢測限為1pmol/L，實現了多種抗原的同時檢測。近些年來，不少研究者利用量子點編碼的方法進行多組分分析。這一技術主要是借助量子點熒光顏色和熒光強度的豐富性進行編碼，能夠同時測定更多的組分，可實現對蛋白質分析、DNA分析及藥物篩選等研究中所蘊藏的海量信息的同步分析。理論上，n種強度m種顏色能夠產生n^m-1種代碼，利用解碼技術可以實現對n^m-1種目標物的分析檢測。根據計算，只需用5～6種顏色與6種不同發光強度的量子點納米粒子進行組合，就能得到10000～40000個可識別的納米粒子編碼微球。如果與10種不同發光強度的量子點納米粒子進行組合，則能得到100萬個可識別的納米粒子編碼微球，這些微球理論上可以對100萬個不同的DNA或蛋白質進行編碼標記，從而實現對樣品中的100萬個不同的DNA或蛋白質進行同時檢測！Nie等將紅、綠、藍三種不同顏色的量子點以1:1:1、1:2:1、2:1:1 的比例包裹入聚苯乙烯微球進行編碼，通過所得熒光光譜的不同特性實現了三種目標DNA的同時檢測。采用類似技術，Gu和Sha等將兩種不同發射波長的量子點以三種強度分別對DNA敏感型的水凝膠和微球進行編碼分別實現了多種不同序列的單鏈DNA的定量檢測和多種寡核苷酸的高通量篩選分型。Wilson和Cooper等分別利用此技術實現了三種血清蛋白（雞卵白蛋白OVA、牛血清白蛋白BSA、人血清白蛋白HAS）以及四種免疫球蛋白G（人IgG、兔IgG、鼠IgG、羊IgG）的同時檢測。