[實(shí)用新型]一種量子點(diǎn)標(biāo)記的試條卡

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201320710132.4
• 申請(qǐng)日: 2013-11-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN203759010U
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬義才;顧敏;馬靈
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都領(lǐng)御生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型屬于體外診斷領(lǐng)域，具體涉及一種自身帶有被檢物標(biāo)準(zhǔn)曲線或系數(shù)參數(shù)等檢測(cè)用信息、結(jié)合具有信號(hào)檢測(cè)功能的儀器能快速定量樣品單一組分或多組分濃度的量子點(diǎn)標(biāo)記的試條卡。

背景技術(shù)

膠體金免疫層析技術(shù)（Gold-Immunochromatography Assay，GICA）現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于免疫檢測(cè)的各個(gè)方面，其以微孔濾膜為載體，利用微孔濾膜的毛細(xì)管作用，使滴加在膜條一端的液體樣品慢慢向微孔濾膜另一端滲移，若液體中有特異抗原或抗體，它們可以和免疫金結(jié)合后再與包被在微孔濾膜上的相應(yīng)抗體或抗原結(jié)合而顯示免疫金顏色（紅色）。該技術(shù)簡(jiǎn)單快速，幾分鐘就能用肉眼觀察結(jié)果。不足之處是：（1）只能定性檢測(cè)樣品，難能實(shí)現(xiàn)樣品定量。（2）難能做到樣品多組分同時(shí)檢測(cè)，檢測(cè)效率低。（3）對(duì)于某些抗原或抗體含量極低的樣本，膠體金顏色很淺很難用肉眼判斷結(jié)果，檢測(cè)靈敏度低。

實(shí)現(xiàn)樣品多組分快速定量檢測(cè)，一直是人們長(zhǎng)期追求的目標(biāo)。近年發(fā)展的納米量子點(diǎn)（quantum dots, QDs），具有獨(dú)特優(yōu)良光學(xué)性質(zhì)：熒光發(fā)光效率高，激發(fā)譜線范圍寬，能“一元激發(fā)，多元發(fā)射”，發(fā)射譜線范圍窄且對(duì)稱，光漂白速度慢，熒光壽命長(zhǎng)，粒徑與生物分子相近，表面修飾后能多功能化，不同粒徑和種類的量子點(diǎn)混合物產(chǎn)生的特征波長(zhǎng)熒光光譜不交疊，非常適于樣品多組分分析。Sweeny等將三種一抗分別與三種不同發(fā)射波長(zhǎng)的量子點(diǎn)(λem=705nm，605nm和655nm)通過(guò)生物素-親和素的特異性結(jié)合形成抗體-量子點(diǎn)復(fù)合物，通過(guò)熒光成像實(shí)現(xiàn)了扁桃體中3種不同抗體的同時(shí)分析，證明應(yīng)用多色量子點(diǎn)可在同一樣品中同時(shí)定位多種生物標(biāo)志物。Nie等用4種不同發(fā)射波長(zhǎng)的量子點(diǎn)標(biāo)記4種抗體實(shí)現(xiàn)了對(duì)霍奇金淋巴瘤中病理標(biāo)志性細(xì)胞HRS（Hodgkin’s and Reed-Sternberg）的成像檢測(cè)，提高了檢測(cè)靈敏度和特異性，有利于臨床快速準(zhǔn)確地診斷霍奇金淋巴瘤。Kobayashi等和Chan等分別用兩種不同顏色的近紅外量子點(diǎn)成像分析小鼠的淋巴管流路和左右胸腔，證明了近紅外量子點(diǎn)的多重成像分析作用。利用量子點(diǎn)的熒光特性除了進(jìn)行成像分析外還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)多種病原體、毒素、抗原、抗體、酶、小分子物質(zhì)以及離子等的定性定量分析。Zahavy等制備熒光探針QD585-IgGαB.anthracis和QD655-IgGαY.pestis，結(jié)合流式細(xì)胞儀實(shí)現(xiàn)了兩種致病菌的同時(shí)定量檢測(cè)，檢測(cè)限可達(dá)到10³cfu/mL。Goldman課題組用多色量子點(diǎn)實(shí)現(xiàn)了葡萄球菌產(chǎn)生的腸毒素B和2,4,6-三硝基甲苯以及霍亂毒素、蓖麻毒素、志賀毒素和葡萄球菌毒素四種毒素的同時(shí)檢測(cè)。除此之外，在微流體蛋白質(zhì)芯片中用量子點(diǎn)作熒光標(biāo)記，利用其熒光多色性能夠同時(shí)快速檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原(CEA)和甲胎蛋白(AFP)，檢測(cè)限低至250fmol/L，比用有機(jī)熒光染料檢測(cè)高4個(gè)數(shù)量級(jí)。Giorgio等將血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGF A）和血管生成素（angiopoietin）分別與不同發(fā)射波長(zhǎng)的量子點(diǎn)構(gòu)成熒光探針，通過(guò)抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)引起量子點(diǎn)的聚集，用流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)特征熒光信號(hào)從而得到相應(yīng)抗原的濃度，檢測(cè)限為1pmol/L，實(shí)現(xiàn)了多種抗原的同時(shí)檢測(cè)。近些年來(lái)，不少研究者利用量子點(diǎn)編碼的方法進(jìn)行多組分分析。這一技術(shù)主要是借助量子點(diǎn)熒光顏色和熒光強(qiáng)度的豐富性進(jìn)行編碼，能夠同時(shí)測(cè)定更多的組分，可實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)分析、DNA 分析及藥物篩選等研究中所蘊(yùn)藏的海量信息的同步分析。理論上，n種強(qiáng)度m種顏色能夠產(chǎn)生n^m-1種代碼，利用解碼技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)n^m-1種目標(biāo)物的分析檢測(cè)。根據(jù)計(jì)算，只需用5～6種顏色與6種不同發(fā)光強(qiáng)度的量子點(diǎn)納米粒子進(jìn)行組合，就能得到10000～40000個(gè)可識(shí)別的納米粒子編碼微球。如果與10種不同發(fā)光強(qiáng)度的量子點(diǎn)納米粒子進(jìn)行組合，則能得到100萬(wàn)個(gè)可識(shí)別的納米粒子編碼微球，這些微球理論上可以對(duì)100萬(wàn)個(gè)不同的DNA或蛋白質(zhì)進(jìn)行編碼標(biāo)記，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中的100萬(wàn)個(gè)不同的DNA或蛋白質(zhì)進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)！Nie等將紅、綠、藍(lán)三種不同顏色的量子點(diǎn)以1:1:1、1:2:1、2:1:1 的比例包裹入聚苯乙烯微球進(jìn)行編碼，通過(guò)所得熒光光譜的不同特性實(shí)現(xiàn)了三種目標(biāo)DNA的同時(shí)檢測(cè)。采用類似技術(shù)，Gu和Sha等將兩種不同發(fā)射波長(zhǎng)的量子點(diǎn)以三種強(qiáng)度分別對(duì)DNA敏感型的水凝膠和微球進(jìn)行編碼分別實(shí)現(xiàn)了多種不同序列的單鏈DNA的定量檢測(cè)和多種寡核苷酸的高通量篩選分型。Wilson和Cooper等分別利用此技術(shù)實(shí)現(xiàn)了三種血清蛋白（雞卵白蛋白OVA、牛血清白蛋白BSA、人血清白蛋白HAS）以及四種免疫球蛋白G（人IgG、兔IgG、鼠IgG、羊IgG）的同時(shí)檢測(cè)。