[實用新型]用于檢測JAK2基因V617F位點突變的試劑盒

有效

• 申請號: 201320689062.9
• 申請日: 2013-11-04
• 公開（公告）號: CN203530310U
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 侯然;朱立文;劉曉峰;梁超;王緒華;方國偉;黃士昂;陳忠
• 申請（專利權）人: 北京海思特臨床檢驗所有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/68
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 陸軍

技術領域

本實用新型屬于分子生物學技術領域，涉及基因突變檢測試劑盒，尤其涉及一種用于檢測JAK2基因V617F位點突變的試劑盒。

背景技術

JAK2基因屬于JAK基因家族，編碼一種JAK酪氨酸蛋白激酶，一部分生長因子和大部分細胞因子能通過JAK激活信號轉導因子和轉錄激活因子（STAT），從而影響基因的轉錄調節。JAK-STAT信號轉導途徑參與細胞的增殖、分化、凋亡以及免疫調節等許多重要的生物學過程。JAK2可以介導多種細胞因子和生長因子的信號轉導，包括紅細胞生成素（EPO）、白細胞介素（IL-3）、生長因子（GH）、血小板生成素（TPO）、粒巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）和粒細胞集落刺激因子（G-CSF），從而調節細胞生長、增殖和分化。JAK2基因特定位點的突變將破壞正常LAK2蛋白酪氨酸激酶活性的自我抑制作用，導致造血細胞的異常增生。

骨髓增殖性腫瘤（MPN）是某一系或多系分化相對成熟的骨髓細胞不斷地克隆性增殖所致的一組腫瘤性疾病的統稱，該疾病包括真性紅細胞增多癥（PV）、原發性血小板增多癥（ET）、原發性骨髓纖維化（PMF）、慢性骨髓細胞性白血病（CML）。研究表明，骨髓增殖性腫瘤（MPN）常伴有JAK2-V617F突變，該突變是JAK2基因的第1849位突變，導致第617位的纈氨酸（V）變為苯丙氨酸（F），該突變發生在65～97%的真性紅細胞增多癥（PV）、23～57%的原發性血小板增多癥（ET）及35～57%的原發性骨髓纖維化（PMF）患者中。世界衛生組織已將JAK2-V617F突變作為MPN的診斷標準之一。因此，檢測JAK2-V617F突變對患者的診斷、治療具有重要的意義。

目前，國內針對JAK2-V617F突變的檢測有常規DNA測序法和普通定性PCR法。常規DNA測序法是從全血粒細胞中抽提DNA，經PCR擴增后直接測序，然而，因為該突變是獲得性的，且僅限于髓系，所以該檢測方法的敏感性只有20～30%，檢測靈敏度低，且試驗程序繁瑣、耗時長、成本高；普通定性PCR法是通過設計特殊引物，同時擴增內參和突變片段，然后通過普通電泳跑膠來觀察檢測結果，該方法的敏感性為20～30%，檢測靈敏度低，檢測結果需要通過看電泳圖，主觀性強，容易出現假陽性或假陰性。

實用新型內容

為了解決上述技術問題，本實用新型的目的在于提供一種用于檢測JAK2基因V617F位點突變的試劑盒，可以快速、準確地檢測JAK2基因V617F位點突變。

為實現上述目的，本實用新型采取的技術方案是：一種用于檢測JAK2基因V617F位點突變的試劑盒，包括盒體（1）、盒蓋（2）和設置在盒體（1）內的襯墊（3），所述襯墊（3）上設有小孔，裝有JAK2-Wild-F引物的試劑管（4）、裝有JAK2-Mutation-F引物的試劑管（5）、裝有JAK2-R引物的試劑管（6）、裝有探針Probe的試劑管（7）、裝有PCR?MIX試劑的試劑管（8）被設置在所述小孔內。

其中，所述試劑盒還包括：裝有去離子水的試劑管（9）。

其中，所述襯墊（3）上設有6個小孔，所述小孔在所述襯墊（3）上分成兩排平行排列。

其中，所述引物濃度為5μmol/L，所述探針濃度為3μmol/L，所述探針兩端分別標記熒光報告基團和熒光淬滅基團，所述引物和探針的序列如下：