[實(shí)用新型]檢測(cè)伏馬毒素B1殘留的膠體金試紙卡

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201320366577.5
• 申請(qǐng)日: 2013-06-25
• 公開（公告）號(hào): CN203535052U
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬(wàn)宇平;馮才茂;扶勝;馮靜;尚朋朋;彭鴿;孫震
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京勤邦生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)伏馬毒素B1的膠體金試紙卡。?

背景技術(shù)

伏馬毒素B1（Fumonisins）是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素，目前已知有28種衍生物，分為A、B、C、P四類。其中以FB1最為常見，在自然污染的玉米中，以伏馬毒素B1量最多，約占伏馬毒素總量的70%。伏馬毒素B1與馬腦白質(zhì)軟化癥、豬的肺水腫癥侯群以及人類食道癌等人畜疾病有關(guān)。另外，伏馬毒素B1還是一種慢性促癌劑，能引起靈長(zhǎng)類動(dòng)物的動(dòng)脈粥樣硬化樣改變。?

國(guó)內(nèi)外已建立了多種伏馬毒素的檢測(cè)方法，已經(jīng)應(yīng)用的有高效液相色譜法（HPLC）、毛細(xì)管氣相色譜法（GC）、毛細(xì)管電泳技術(shù)（CE）、液質(zhì)聯(lián)用（LC/MS）、氣質(zhì)聯(lián)用（GC/MS）及酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)（ELISA）等方法。其中高效液相色譜法（HPLC），靈敏度高，在全球范圍內(nèi)的玉米及其制品的調(diào)查中，90%以上的實(shí)驗(yàn)室用的都是HPLC法，其檢測(cè)限可以達(dá)到0.05～0.1mg/kg。但是，該法需要對(duì)檢測(cè)樣品進(jìn)行嚴(yán)格的預(yù)處理，儀器化程度高且價(jià)格昂貴，分析速度慢，同時(shí)要求有專業(yè)的操作人員，不利于在基層推廣使用及大量樣本篩選。免疫學(xué)技術(shù)具有敏感、特異、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，近年來(lái)已被應(yīng)用于伏馬毒素B1殘留檢測(cè)。膠體金免疫層析法檢測(cè)時(shí)間短，穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)便、無(wú)需其他儀器設(shè)備，結(jié)果判斷直觀可靠，適用于進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速篩選。?

實(shí)用新型內(nèi)容

本實(shí)用新型的目的在于針對(duì)上述不足提供一種靈敏度高、成本低、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短、檢測(cè)伏馬毒素B1的試紙卡。?

本實(shí)用新型的試紙卡包括底板、附著在底板上依次緊密相連的樣品吸收墊、結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜和吸水墊，結(jié)合物釋放墊不是完全覆蓋在樣品吸收墊之下，而是部分區(qū)域覆蓋于樣品吸收墊之下，優(yōu)選結(jié)合物釋放墊的三分之二區(qū)域覆蓋于樣品吸收墊之下。這樣可以延長(zhǎng)檢測(cè)結(jié)果觀察時(shí)間，樣品吸收墊也可以將檢測(cè)液體充分吸收，與金標(biāo)抗體完全接觸充分反應(yīng)，再層析至反應(yīng)膜上進(jìn)行反應(yīng)，可以有效的減少誤差，還可以防止檢測(cè)樣本中一些干擾成份使金標(biāo)抗體中的蛋白失去活性，影響金標(biāo)抗體與包被原的結(jié)合。?

所述反應(yīng)膜上分別包被有伏馬毒素B1半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物構(gòu)成的檢測(cè)線印跡和包被羊抗鼠抗抗體構(gòu)成的質(zhì)控線印跡。?

本實(shí)用新型試紙卡的底板為PVC板或其它硬質(zhì)不吸水的材料；反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜；樣品吸收墊由聚酯材料或玻璃棉制成；吸水墊為吸水紙；結(jié)合物釋放墊由纖維制成，結(jié)合物釋放墊噴涂有伏馬毒素B1單克隆抗體-膠體金結(jié)合物。?

偶聯(lián)伏馬毒素B1半抗原的載體蛋白可用牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白、人血清白蛋白等，在反應(yīng)膜上的檢測(cè)線印跡和質(zhì)控線印跡相互平行且與樣品液流動(dòng)方向垂直，檢測(cè)線印跡位于靠近結(jié)合物釋放墊的末端的一側(cè)，質(zhì)控線印跡位于遠(yuǎn)離結(jié)合物釋放墊的末端的一側(cè)。?

本實(shí)用新型試紙卡具有如下有益效果：?

1.靈敏度高。伏馬毒素B1藥物快速檢測(cè)試紙卡以膠體金標(biāo)記高親和力的單克隆抗體為基礎(chǔ)制備而成，金標(biāo)抗體中金顆粒與抗體分子之間無(wú)價(jià)健形成，二者通過(guò)異性電荷間的范德華力相結(jié)合，膠體金對(duì)單克隆抗體特異性和親和力影響很小，且具有較高的標(biāo)記率。因此，快速檢測(cè)試紙卡具有較高的靈敏度，本試紙卡對(duì)樣品的檢測(cè)限為20μg/kg。?

2.操作簡(jiǎn)便快速。使用快速檢測(cè)試紙卡時(shí)無(wú)需任何其它試劑，只要將樣品前處理后用滴管滴入試紙卡孔內(nèi)，滴加2～3滴，加樣后計(jì)時(shí)，7～10min內(nèi)觀察結(jié)果。?

3.成本低，投資少。使用快速檢測(cè)試紙卡，不需另配儀器設(shè)備及其他試劑，使現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)一步到位，成本低廉，投資少，見效快。?

4.顯示檢測(cè)結(jié)果形象、直觀準(zhǔn)確。快速檢測(cè)試紙卡以顯示紅線印跡作為試紙卡的陽(yáng)性和陰性標(biāo)記，即在硝酸纖維素膜上只有質(zhì)控線顯示紅色表示在被檢測(cè)樣品液中伏馬毒素B1濃度高于檢測(cè)限，檢測(cè)線和質(zhì)控線均顯示紅色表示在被檢測(cè)樣品中不含伏馬毒素B1或其濃度低于檢測(cè)限，結(jié)果判定形象、直觀、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單明了，不容易出現(xiàn)誤判。?

5.易于大范圍推廣應(yīng)用。快速檢測(cè)試紙卡操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)范圍廣，能較好滿足不同層次人員的需要，具有廣闊的市場(chǎng)前景和較大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。?

附圖說(shuō)明

圖1為伏馬毒素B1快速檢測(cè)試紙卡結(jié)構(gòu)示意圖，其中，1、樣品吸收墊；2、結(jié)合物釋放墊；3、反應(yīng)膜；4、吸水墊；5、檢測(cè)線；6、質(zhì)控線；7、底板；?

圖2為伏馬毒素B1快速檢測(cè)試紙卡陰性（圖2a）、陽(yáng)性（圖2b）、無(wú)效（圖2c）顯色示意圖，其中T為檢測(cè)線，C為質(zhì)控線。?

具體實(shí)施方式