[實用新型]一種H5亞型禽流感病毒抗體和新城疫病毒抗體的ELISA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201320089667.4
• 申請日: 2013-02-27
• 公開（公告）號: CN203101396U
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發明（設計）人: 趙林萍;曾小宇;張如民;任寶紅;李丹;孫強;苗銀萍;王鵬;李慧英;王集美;魯龍;孫帥嶺;魏卓;王思敏;楊陽;岳崢
• 申請（專利權）人: 鄭州中道生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 劉建芳;楊海霞

本實用新型屬于禽類疫病檢測技術領域，具體涉及一種能同時對H5亞型禽流感病毒抗體和新城疫病毒抗體進行批量檢測的ELISA檢測試劑盒，適用于動物疫病流行病的調查與檢測。

禽流感和新城疫都是流行于禽類中的烈性傳染病，嚴重威脅畜禽業的正常發展，養雞場的禽類一旦感染這些疫病，將造成嚴重的經濟損失。

禽流感（avian?influenza，AI）是由禽流感病毒引起的一種主要流行于雞群中的烈性傳染病。其病毒分為不同的亞型，迄今已經發現16個HA亞型（H1―H16）的禽流感病毒，雞、火雞、鴨和鵪鶉等家禽及野鳥均可感染，發病情況輕重不一，有的急性死亡，有的無癥狀帶毒，其中H5亞型的禽流感病毒能引發高致病性禽流感，其發病率和死亡率極高，是危害禽類的主要烈性傳染病之一，OIE將其列為A類疫病。

新城疫（newcastle?disease，ND）是由新城疫病毒引起禽的一種急性、熱性、敗血和高度接觸性傳染病，其以高熱、呼吸困難、下痢、神經紊亂、黏膜和漿膜出血為特征，具有很高的發病率和病死率，是危害養禽業的主要傳染病之一，OIE將其列為A類疫病。

由此可見，養殖場的禽類一旦感染到禽流感和新城疫的病毒，將會導致禽肉類市場供求關系混亂、禽產品出口受阻、政府財政負擔加重和公眾恐慌。因此，使用禽流感和新城疫的疫苗進行免疫注射，并對免疫效果進行檢測以確定其是否產生相應的抗體保護具有非常重大的意義。

本實用新型目的在于提供一種能同時、批量、有效檢測H5亞型禽流感病毒抗體和新城疫病毒抗體的ELISA檢測試劑盒。

為了實現上述目的，本實用新型采用如下技術方案：

一種H5亞型禽流感病毒抗體和新城疫病毒抗體的ELISA檢測試劑盒，該試劑盒有一個盒體，其中，所述盒體內設有抗原包被反應板、H5亞型禽流感抗體陽性對照血清、新城疫抗體陽性對照血清、H5亞型禽流感抗體陰性對照血清、新城疫抗體陰性對照血清、20×濃縮洗滌液、樣品稀釋液、酶標結合物、顯色劑A、顯色劑B和終止液。

具體的，所述抗原包被反應板的規格為96孔（96T），從左至右被均分為檢測區I和檢測區II兩個區域，每個區域有48T，所述檢測區I包被H5亞型禽流感病毒蛋白抗原，檢測區II包被新城疫病毒蛋白抗原。

所述的酶標結合物為酶標記的抗雞IgG。

上述的H5亞型禽流感病毒蛋白抗原和新城疫病毒蛋白抗原均為高純度的原核表達蛋白，可按照本領域常規技術制備或購買市售產品均可。盒體內可分為抗原包被反應板和試劑反應體系兩部分；抗原包被反應板可以用PS材質的酶標板制成，試劑反應體系的包裝瓶可以是聚丙烯瓶。

本實用新型采用酶聯免疫間接法，將H5亞型禽流感病毒蛋白抗原和新城疫病毒蛋白抗原分別包被到包被反應板對應的兩個檢測區域內，所包抗原可分別與待檢測樣品中的特異性抗體反應，形成抗原?抗體復合物被吸附到固相包被反應板上，再加入酶標結合物（酶標記的抗雞IgG），形成固相病毒抗原?病毒抗體?抗雞抗體?HRP免疫復合物。如果待檢樣品中含有相應的抗體，加入顯色劑后即為酶催化顯色，為陽性；反之為陰性。

本實用新型采用酶聯免疫間接法，將H5亞型禽流感病毒蛋白抗原和新城疫病毒蛋白抗原分別包被到包被反應板對應的兩個檢測區域內，所包抗原可分別與待檢測樣品中的特異性抗體反應，形成抗原?抗體復合物被吸附到固相包被反應板上，再加入酶標結合物（酶標記的抗雞IgG），形成固相病毒抗原?病毒抗體?抗雞抗體?HRP免疫復合物。如果待檢樣品中含有相應的抗體，加入顯色劑后即為酶催化顯色，為陽性；反之為陰性。

本實用新型所述試劑盒通過對包被反應板的抗原包被濃度和酶標記結合物濃度的調整，使其能夠產生特異性顯色，從而進行H5亞型禽流感病毒抗體和新城疫病毒抗體的檢測。該試劑盒能同時對H5亞型禽流感病毒抗體和新城疫病毒抗體進行批量檢測，具有靈敏度高、特異性好、快速檢測大批量樣品等優點，可用于動物疫病流行病的檢測與調查。

圖1為本實用新型所述試劑盒的橫切面剖視圖，即盒體內設置的組成及位置示意圖；圖中，1為抗原包被反應板；4為1mL?H5亞型禽流感抗體陽性對照血清；5為1mL新城疫抗體陽性對照血清；6為1mL?H5亞型禽流感抗體陰性對照血清；7為1mL新城疫抗體陰性對照血清；8為50mL?20×濃縮洗滌液；9為11mL樣品稀釋液；10為11mL酶標結合物；11為6mL顯色劑A；12為6mL顯色劑B；13為6mL終止液；14為盒體；

圖2為圖1中的抗原包被反應板的結構示意圖，圖中，1為抗原包被反應板；2為檢測區I；3為檢測區II。