[實用新型]雞性別快速鑒別試劑盒

有效

• 申請號: 201320076676.X
• 申請日: 2013-02-19
• 公開（公告）號: CN203200273U
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 李慧芳;胡艷;宋衛濤;朱文奇;章明;顧華兵;朱春紅;束婧婷;湯青萍;劉洪祥;姬改革
• 申請（專利權）人: 江蘇省家禽科學研究所
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/68
• 代理公司: 揚州蘇中專利事務所(普通合伙) 32222
• 代理人: 許必元

技術領域

本實用新型屬于生物技術領域，利用PCR-瓊脂糖電泳技術，提供一種雞性別快速鑒別試劑盒。?

背景技術

雞性別的鑒定方法一般為外形鑒別法和翻肛鑒別法。外形鑒別法一般用于成年雞的性別鑒定，雖然簡單方便，但用于雛雞的性別鑒定則準確率低，容易出現鑒別錯誤；翻肛鑒別法，一般用于雛雞的性別鑒定，必須在雞子出殼后12內進行操作。在此時間內，雌雄雛雞生殖隆起的性狀最顯著；孵出后24小時以上，肛門發緊，難于翻開，而且生殖突起萎縮，甚至陷入泄殖腔深處，不便觀察。翻肛鑒別法用于雛雞性別鑒定，往往具有1-2%的誤判率，同時需要操作者技術嫻熟，否則對雛雞的傷害較大。隨著雞的胚胎學、發育生物學和分子生物學等學科研究的深入，雞胚胎期和出雛早期性別的鑒定更是成為一個科學問題。?

因此，需要開發一種簡單方便，能夠快速、準確鑒別雞性別的裝置。?

家禽的性別由W染色體和Z染色體決定，家禽雌性基因型為ZW型，雄性基因型為ZZ型，Z或W傳遞給子代的概率是一樣的，均為二分之一，其遺傳方式遵循孟德爾的獨立分配定律和自由組合定律。目前，發現有少數分布在禽類Z和W染色體上的基因，它們不出現在假常染色體區，但都是以W和Z單拷貝出現，且以性染色體兩種類型的非重組部分的形式存在。在這些基因中，某些基因的內含子在W染色體和Z染色體中的序列大小不同，就使得能夠通過設計保守性引物，使用PCR-瓊脂糖電泳技術，根據PCR產物的片段大小和數量來判斷個體的性別。?

實用新型內容

本實用新型的目的是針對上述現有雞性別鑒定技術的不足，提供一種設計合理、便于雞性別鑒定、價格低廉的基因分型試劑盒。?

本實用新型的目的是通過以下技術方案實現的：雞性別快速鑒別試劑盒，包括盒體、盒蓋，其特征是，所述盒體內設有襯墊，襯墊上設有四個孔腔，四個孔腔內分別設有用于CHD基因PCR擴增的上下游引物混合物HYp、擴增緩沖液、DNA?marker、瓊脂糖。?

本實用新型可用于胚胎期及出雛后雞性別快速鑒定的PCR引物，同時還提供了一種利用上述雞性別鑒定用PCR引物鑒定雞性別的方法。其方法為：以待測雞的總DNA為模板，采用雞性別鑒定用PCR引物進行PCR擴增，然后采用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產物，當擴增產物只出現543bp的特異性擴增條帶時判定為雄性雞（ZZ型，一條大的PCR產物片段），當擴增產物同時出現543bp的特異性擴增條和388bp的特異性擴增條時判定為雌性雞（ZW型，一大一小的兩條PCR產物片段）。?

其中HYp詳細信息如下：?

引物混合物HYp表示用于CHD基因PCR擴增的上下游引物混合物，引物信息如下：

上游引物??5'-?GTAGAAAAGTCTTTACCTGCTAAGG?-?3'，

下游引物??5'-?ATAGAATTCATTATCATCTGGTG?-?3'。?

本試劑盒使用方法：?

1、PCR擴增目的片段

1）PCR擴增反應體系準備

在200?μL?的PCR薄壁管中，加入2?μL模板DNA（約50?ng?）、12.5?μL擴增緩沖液、2?μL引物HYP?(5?μmol/L)、和8.5?μL水，PCR的反應體系為25?μL，充分混勻后短暫離心。

2）PCR擴增反應程序設置?

在eppendorf?PCR儀上設置PCR的反應條件為：94℃預變性4?min，后94℃變性30?s，55℃復性30?s，72℃延伸30?s，35個循環，最后72℃延伸6?min，4℃保存備用。程序設置完畢后，將PCR反應管放入PCR儀進行反應擴增。

2、鑒定性別?

反應結束后，取4-10?μL反應產物在2?%瓊脂糖膠，1×TBE電泳液中電泳。室溫下，按照電泳槽寬度×6-8?V，電泳20分鐘。根據PCR擴增產物電泳圖譜，根據基因分型鑒定性別。

本實用新型由CHD基因PCR擴增的上下游引物混合物HYp、擴增緩沖液、DNA?marker和瓊脂糖組成。與現有技術相比具有以下優點，本實用新型根據同時存在于雞性染色體W染色體和Z染色體上的CHD1基因序列合理設計PCR引物，利用PCR-瓊脂糖電泳技術和基因分型方法，確定個體雞的性別，具有操作簡單方便、便于快速鑒別雞性別、結果準確和價格低廉等優點，避免了采用傳統方法耗時、耗力和易出錯的缺點。?

本實用新型通過設計特異性引物，PCR擴增產物更具特異性，保證了通過特異性PCR產物進行雞性別基因分型的準確性。本實用新型設計合理，使用方便、結果可靠且成本低廉。?

附圖說明