[實用新型]一種MicroRNA定量檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201320053251.7
• 申請日: 2013-01-30
• 公開（公告）號: CN203174109U
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 姚遠颋;王海峰;費倩嵐;談竹君;勞昕元
• 申請（專利權）人: 上海黃離生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12M1/34
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;沈利

技術領域

本實用新型屬于生物技術領域，具體涉及一種?MicroRNA定量檢測試劑盒。?

背景技術

MicroRNA是近年來在多種真核細胞及病毒中發現的一類來源內源性染色體上的非編碼單鏈RNA，長度為21～25nt的短序列，在進化上具有高度的保守性，能夠通過與靶mRNA特異性的堿基互補配對，引起靶mRNA降解或者抑制其翻譯，從而對基因進行轉錄后的表達調控（O`Donnell?KA,Wentzel?EA,Zeller?KI,et?al.e-Myc-regulated?microRNAs?modulate?E2F1?expression[J].Nature，2005,4(7043):839.）。由于microRNA序列在不同的生物中具有一定的保守性，目前普遍認為?MicroRNA的功能是參與生命的一些基本過程，如發育過程中的細胞增殖、細胞死亡、應激反應和脂肪代謝等，越來越多的證據表明?MicroRNA在細胞中起著調控基因表達的重要作用。最近的研究發現?MicroRNA與細胞的癌變有著極為密切的關系，已經發現?MicroRNA與肺癌、結直腸腫瘤、伯基特淋巴瘤和慢性淋巴細胞白血病等腫瘤疾病有關（Meltzer?PS.Cancer?genemics:Small?RNAs?with?big?impacts[J].Nature,2005,435(7043):745.）。?

由于?MicroRNA分子只有20-25nt左右大小，檢測較為困難。以前主要采用的方法是Northern?blot等雜交的方法進行檢測，方法繁瑣，不易成功，且?MicroRNA極易降解，對于結果影響也較大。?

為了克服之前檢測方法的缺陷，Allawi等建立了Invader?Assay的方法(Allawi?HT，Deahlberg?JE，OlsonS,et?al.Quantitation?of?microRNAs?using?amodified?Invader?assay.RNA,2004,10:1153-1161)，Liu等建立了寡核苷酸芯片方法(Liu?C，Calmn?GA，et?al.An?oligonucleotide?microchip?for??genome-wide?micro?RNA?profiling?in?human?and?mouse?tissues.PNAS，2004，101(26)：9740-9744)，這種方法提高了檢測的敏感性及實用性，但這種方法需要熒光標記和熒光儀或芯片檢測儀，而且由于micro?RNA分子太小，應用也受到一定的限制。?

如今，對?MicroRNA前體的檢測主要是采用RT-PCR的方法(Schmittgen?TD，Jiang?J，Liu?Q，et?al.A?high-throughput?method?to?monitor?the?expression?of?micro?RNA?precursors.Nucleic?Acids?Research．2004，32(4)：e43)，采用隨機引物或與?MicroRNA前體互補的引物直接進行反轉錄，但是這僅僅只能針對特異的?MicroRNA，而且半定量的方法不能準確地表現出?MicroRNA的表達量，所以該方法已經漸漸退出了?MicroRNA分子的檢測的行列。?