[實用新型]一種檢測多種抗核抗體的免疫印跡試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201320035263.7
• 申請日: 2013-01-23
• 公開（公告）號: CN203191382U
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設計）人: 胡鹍輝;陽輝;劉清波;何林
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 黃良寶

技術領域

本實用新型涉及一種檢測多種抗核抗體(anti-nucleic?antibody，ANA)的試劑盒，屬于生物醫(yī)學領域。

背景技術

自身免疫性疾病（autoimmune?diseases）是指機體對自身抗原發(fā)生免疫反應而導致自身組織損害所引起的疾病，WHO（World?Health?Organization，世界衛(wèi)生組織）曾指出其患病人數(shù)在占總人群的3~5%，據權威統(tǒng)計，我國自身免疫性疾病患者的發(fā)病率在6000萬人以上。自身免疫性疾病好發(fā)于女性和中老年人，其特點是起病緩慢，病程長且反復發(fā)作，疾病的中晚期對健康危害很大，患者的生活質量低，療效差，早期診斷有助于自身免疫性疾病的臨床控制。

許多自身抗體在相關疾病的發(fā)病前一段時間就可從血清中檢測到。幾十年來，免疫學研究已經發(fā)現(xiàn)多數(shù)自身免疫性疾病患者血清中存在著特異性自身抗體，抗核抗體是以真核細胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱。抗核抗體（ANA）是針對細胞核抗原的自身抗體，不同類型或種類的ANA具有不同的特異性，檢測ANA對診斷膠原性疾病特別是系統(tǒng)性紅斑狼瘡和與其密切相關的混合結締組織疾病以及其他風濕性疾病具有重要意義。抗AMA-M2抗體是原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）的特異性抗體，可在90%的PBC患者中檢測到，也常出現(xiàn)在膠原性疾病患者中，且在出現(xiàn)臨床表現(xiàn)前即可產生。抗Jo-1抗體、抗PM-Scl抗體、抗Mi-2抗體和抗Ku抗體是診斷多發(fā)性肌炎/皮肌炎和與肌炎相關的其他自身免疫性疾病及其重疊綜合征的標志物。

目前，臨床實驗室使用的檢測樣本中抗核抗體的方法包括間接免疫熒光分析法、酶聯(lián)免疫吸附法或免疫印跡法，但各有其不足。間接免疫熒光分析法是檢測自身抗體的常用技術，其實驗基質為Hep-2細胞或不同靈長類肝臟組織冰凍切片，含有完整的抗原譜。許多組織經間接免疫熒光分析法著染可提示自身抗體的存在，因其是通過細胞核或細胞漿內形成的熒光結合物（稱為“核型”）來推測可能的自身抗體種類，故不能對自身抗體進行具體客觀的評價，因此其特異性的證實需要其他技術如免疫印跡法、酶聯(lián)免疫法等進行二級確認試驗。并且對間接免疫熒光分析法著染的鑒定有一定的主觀性，因而對結果的解釋可能在不同時間點、不同觀察者之間、新老組織切片之間存在差異。酶聯(lián)免疫吸附法具有成熟度高、靈敏度高、特異性強、操作方法簡便快速、無放射性污染且檢測結果排除了認為的主觀判斷，以及應用范圍廣等很多優(yōu)點，但一次試驗只能檢測單一指標，通量低，檢測成本較高，在自身免疫性疾病的輔助診斷應用推廣方面存在著局限性。免疫印跡診斷試劑是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發(fā)展起來的一種免疫生化技術，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性的優(yōu)點。但是在SDS-PAGE的過程中，許多抗原決定簇的構像可能遭到破壞，不能與特異性抗體發(fā)生或者發(fā)生非特異性結合，造成結果判斷錯誤。

目前，國內外臨床檢驗領域已有少數(shù)用于多種抗核抗體檢測的免疫印跡產品，但尚無用于檢測17種抗核抗體的免疫印跡產品，且現(xiàn)有產品質控體系不完善，不便于操作者對顯色結果進行快速、直觀、準確的判斷。

發(fā)明內容

綜上所述，本實用新型的目的在于解決現(xiàn)有用于多種抗核抗體檢測的免疫印跡產品質控體系不完善，不便于操作者對顯色結果進行快速、直觀、準確的判斷的技術不足，而提出的一種檢測多種抗核抗體的免疫印跡試劑盒。

為實現(xiàn)本實用新型的目的，采用如下的技術方案：一種檢測多種抗核抗體的免疫印跡試劑盒，包括：反應膜條、酶結合物、顯色底物、洗滌液、樣本稀釋液和終止液，其特征在于：反應膜條由載體和固定在載體上的硝酸纖維素膜或尼龍膜所組成，該硝酸纖維素膜或尼龍膜上含有分別由dsDNA、核小體、組蛋白、Sm、RNP/Sm、核糖體P蛋白、PCNA、SSA-60、SSA-52、SSB、CENP-B、Scl-70、JO-1、PM-Scl、ANA-M2、Mi-2、Ku共17種中的至少兩種天然或重組抗原包被而成的兩條以上平行的檢測線，1條包被濃度為30-50μg/ml的高濃度質控帶，1條包被濃度為15-25μg/ml的中濃度質控帶，及1條包被濃度為1-10μg/ml的低濃度質控帶。

所述的載體為雙面粘性的PVC板，正面與所述的硝酸纖維膜或尼龍膜固定粘接，背面固定粘接有透明的PET底襯板。

所述的高濃度質控帶、中等濃度質控帶和低濃度質控帶由人IgG，或抗鼠IgG或抗羊IgG劃線而成。

所述的酶結合物為辣根過氧化酶標記的鼠抗人IgG；所述的顯色底物為四甲基聯(lián)苯胺；所述的洗滌液為20×Tris緩沖液；所述樣本稀釋液為含封閉劑的Tris緩沖液；所述的終止液為0.1M/L硫酸。