[發明專利]菊葉薯蕷皂素的提取方法

有效

• 申請號: 201310757073.0
• 申請日: 2013-12-28
• 公開（公告）號: CN103882086A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 畢桂燦;趙長偉
• 申請（專利權）人: 趙長偉
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20;C12R1/23
• 代理公司: 北京安博達知識產權代理有限公司 11271
• 代理人: 徐國文

1.一種菊葉薯蕷皂素的提取方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

1)菊葉薯蕷糊漿化過程：將菊葉薯蕷原料洗凈，晾干，經粉碎后過篩得細粉末，粉末與40～60℃溫水按重量比為1∶3-8的比例攪拌調漿；

2)菊葉薯蕷糊漿糖化過程：向步驟1)得到的漿料中加入α-淀粉酶，α-淀粉酶與菊葉薯蕷的重量比為10-40μ：1，調節pH值為5.0-7.0，加熱至90～100℃并保溫液化30-80min，然后冷卻至55-65℃，加入纖維素酶和糖化酶，調pH值至4.0-5.0，保溫糖化50-80min得到糖化漿；

3)分離過程：將步驟2)得到的糖化漿通過振動篩進行篩分，篩上物進行離心分離得到糖化漿沉淀和糖化漿清液，篩下物與糖化漿清液混合后采用微濾膜過濾得到糖化液，膜截留物與糖化漿沉淀混合得到固體渣；

4)水解過程：向步驟3)得到的固體渣中加入鹽酸或硫酸，加壓進行第一次水解后，用鹽酸或硫酸將固體渣配成0.3mol的鹽酸或硫酸液，進行過濾分離得到濾液和濾渣，濾液調pH值至5.0-7.0后備用；濾渣加壓進行第二次水解后，用清水洗至中性，提取液體備用；

5)發酵過程：將步驟3)得到的糖化液與步驟4)得到的濾液和提取液體混合，并調整成濃度為50-200g/L的混合液，按比例向每升混合液中加入尿素、豆粕中的一種或兩種混合物，加入無機鹽離子MgSO₄，KH₂PO₄，ZnSO₄，MnCl₂，CuSO₄得到發酵培養基，將發酵培養基的pH值調至5.0-6.0，滅菌冷卻后按發酵培養基體積的5％-8％接種量接入嗜酸乳桿菌，在搖床及常溫下發酵培養2-3天得發酵液；

6)提取菊葉薯蕷皂素過程：調節發酵液的pH值至6.5-7.5，然后離心分離得到發酵液清液和發酵液沉淀，將發酵液沉淀烘干，加入乙醇進行提取后抽濾得到抽濾液和殘渣；用石油醚反復萃取抽濾液，靜置分層，合并石油醚層，再濃縮結晶后得到成品皂素。

2.如權利要求1所述的菊葉薯蕷皂素的提取方法，其特征在于，步驟2)中，所述纖維素酶與菊葉薯蕷的重量比為100-120μ∶1，所述糖化酶與菊葉薯蕷的重量比為100-200μ∶1。

3.如權利要求1所述的菊葉薯蕷皂素的提取方法，其特征在于，步驟4)中，向固體渣加鹽酸或硫酸使pH＜2，加壓至0.3Mpa進行第一次水解，第一次水解時間為0.5小時以上；第二次水解時間為2小時以上；兩次水解的條件為：酸濃度為0.52-0.66mol/L，反應溫度為100-120℃。

4.如權利要求1所述的菊葉薯蕷皂素的提取方法，其特征在于，步驟5)中，按比例向每升混合液中加入下述各物質的用量為：

尿素、豆粕中的一種或兩種混合物的用量為1-10g，無機鹽離子MgSO₄0.5-1.5g，KH₂PO₄2-3g，ZnSO₄2-6mg，MnCl₂0.1-0.3umol，CuSO₄0.1-0.3mg。

5.如權利要求1所述的菊葉薯蕷皂素的提取方法，其特征在于，步驟5)中，發酵過程中搖床的轉速為100～300r/min，培養溫度為25～35℃。

6.如權利要求1所述的菊葉薯蕷皂素的提取方法，其特征在于，步驟6)中，用0.75-1.25mol/L的NaOH溶液調節發酵液的pH值至6.5-7.5。

7.如權利要求1所述的菊葉薯蕷皂素的提取方法，其特征在于，步驟6)中，發酵液離心分離時的轉速為5000-7000r/min，離心時間為10-15min。

8.如權利要求1所述的菊葉薯蕷皂素的提取方法，其特征在干，步驟6)中，對烘干后的發酵液沉淀進行提取時，加入沉淀量2-4倍的乙醇提取3-4h。

9.如權利要求1所述的菊葉薯蕷皂素的提取方法，其特征在于，步驟6)中，用抽濾液體積1/3-1/2的石油醚反復萃取抽濾液至少3次。