[發(fā)明專(zhuān)利]一種體外輔助診斷胰腺癌的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310754426.1
• 申請(qǐng)日: 2013-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104745678B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張辰宇;張棟;劉丹青;管丹萍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇命碼生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886
• 代理公司: 南京天華專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

本發(fā)明屬于生物診斷檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種體外輔助診斷胰腺癌的試劑盒。人血清miR‐25作為檢測(cè)靶標(biāo)可在制備胰腺癌診斷試劑中應(yīng)用。一種用于體外輔助診斷胰腺癌的試劑盒，包含人血清miR‐25的逆轉(zhuǎn)錄引物、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)人血清miR‐25的引物和探針。本發(fā)明通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)人血清中的miR‐25與胰腺癌發(fā)生具有相關(guān)性，基于此發(fā)現(xiàn)提出了血清miR‐25可以作為一個(gè)新的胰腺癌檢測(cè)靶標(biāo)，在制備胰腺癌診斷試劑中應(yīng)用。進(jìn)而通過(guò)設(shè)計(jì)miR‐25的逆轉(zhuǎn)錄體系、以及定性/或定量檢測(cè)體系，制備得到一種用于體外輔助診斷胰腺癌的試劑盒，該試劑盒具有良好的敏感度和特異度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物診斷檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種體外輔助診斷胰腺癌的試劑盒。

背景技術(shù)

胰腺癌（pancreatic carcinoma）主要指胰外分泌腺腺癌，是胰腺惡性腫瘤中最常見(jiàn)的一種，占常見(jiàn)腫瘤的1%-2%，占消化道腫瘤的8%-10%。全球胰腺癌發(fā)病率約為9/10萬(wàn)，死亡率也接近9/10萬(wàn)。據(jù)美國(guó)臨床腫瘤協(xié)會(huì)的統(tǒng)計(jì)，2005年，全美胰腺癌新發(fā)病例為32180例，病死數(shù)為31800例，在惡性腫瘤死亡率中居第四位。在胰腺癌的發(fā)病率和死亡率上，我國(guó)的情況與美國(guó)相似，目前，我國(guó)胰腺癌發(fā)病率估計(jì)為10/10萬(wàn)，且有逐年增加的趨勢(shì)，患者的總體生存率為0.5%～1%。

由于胰腺癌早期癥狀隱匿，故早期診斷十分困難，當(dāng)出現(xiàn)典型癥狀時(shí)多已屬晚期，治療效果也不理想，病死率很高，5年生存率僅為4%，因此胰腺癌是惡性程度高，進(jìn)展迅速、嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的腫瘤之一。

目前，胰腺癌的診斷方法包括內(nèi)鏡、影像學(xué)檢查和腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)。內(nèi)鏡及影像學(xué)檢查方法包括B超檢查、電子計(jì)算機(jī)X線斷層掃描(CT)、磁共振(MRI)、磁共振胰膽管成像(MRCP)、正電子發(fā)射斷層掃描(PET)、正電子發(fā)射斷層掃描(PET)以及超聲內(nèi)鏡檢查(EUS)、經(jīng)口胰管鏡(POPS)、胰管內(nèi)超聲檢查(PIDUS)等。但由于胰腺位置隱匿，內(nèi)鏡及影像學(xué)技術(shù)的診斷效果有限。目前，用于胰腺癌診斷和隨訪的腫瘤標(biāo)記物有10余種，但迄今為止尚未找到一種對(duì)胰腺癌診斷靈敏性和特異性都十分滿意的腫瘤標(biāo)志物。因此各指標(biāo)單獨(dú)使用對(duì)胰腺癌早期診斷價(jià)值不大，可用于判斷胰腺癌切除后是否有殘余病灶以及復(fù)發(fā)的監(jiān)測(cè)。常用的腫瘤標(biāo)志物包括CA19-9、CEA（癌胚抗原）。但是，上述腫瘤標(biāo)記物的靈敏度和特異性相對(duì)較低，它們的檢測(cè)結(jié)果還不能作為胰腺癌確診的指標(biāo)。胰腺癌的早期診斷率是提高胰腺癌病人生存率最關(guān)鍵的因素，然而上述任何一種腫瘤標(biāo)記物還難以滿足胰腺癌早期診斷的這種需求。一些傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)手段，如組織細(xì)胞檢測(cè)存在著其固有的缺陷，取材位置不當(dāng)、組織細(xì)胞標(biāo)本材料不足或人為經(jīng)驗(yàn)不足等都將導(dǎo)致誤診。同時(shí)，某些有創(chuàng)的檢測(cè)方法如逆行胰膽管造影（ERCP）甚至可以造成出血、繼發(fā)胰腺炎、膽汁漏、休克等嚴(yán)重并發(fā)癥。影像學(xué)雖然已被廣泛應(yīng)用于癌癥的檢查和診斷，但其在疾病程度的定性上仍存在著很大的局限性。因此，目前非常有必要尋找能夠彌補(bǔ)現(xiàn)有診斷方法的新型、靈敏并且應(yīng)用方便的疾病檢測(cè)標(biāo)記物。

MicroRNA為一類(lèi)長(zhǎng)約19-23個(gè)核苷酸的單鏈小核糖核酸（RNA）分子，位于基因組非編碼區(qū)，進(jìn)化上高度保守，可以通過(guò)抑制靶基因的翻譯（Translation）過(guò)程對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)。微小核糖核酸參與正常生理活動(dòng)，如生物個(gè)體發(fā)育、組織分化、細(xì)胞凋亡以及能量代謝等，也與許多疾病的發(fā)生及發(fā)展存在著緊密的聯(lián)系。發(fā)明人率先發(fā)現(xiàn)血清中microRNA在各種環(huán)境中表達(dá)非常穩(wěn)定，并且與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展具有極強(qiáng)的相關(guān)性；再加上其取材便利，使得血清microRNA具備了成為優(yōu)異生物標(biāo)志物的潛質(zhì)，具有良好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種新的胰腺癌血清標(biāo)記物人血清miR-25作為檢測(cè)靶標(biāo)在制備胰腺癌診斷試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的是提供定性或定量檢測(cè)人血清miR-25的引物和/或探針在制備胰腺癌診斷試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的又一目的是提供一種體外輔助診斷胰腺癌的試劑盒。