[發明專利]一種磷光能量轉移體系，其合成方法，用途以及凝血酶的檢測方法

無效

• 申請號: 201310753364.2
• 申請日: 2013-12-30
• 公開（公告）號: CN103881701A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 高峰;張璐
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: C09K11/57
• 分類號: C09K11/57;C09K11/65;C09K11/02;C01B31/02;G01N21/64;B82Y30/00;B82Y40/00
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 朱順利

技術領域

本發明涉及一種磷光能量轉移體系，其合成方法，用途以及凝血酶的檢測方法。?

背景技術

腫瘤組織對周圍組織的侵襲，轉移的形成以及腫瘤組織和腫瘤患者血液本身的變化均可導致病人凝血機制的改變，產生不同程度的出血傾向。凝血酶是一種重要的生理蛋白酶，在血液凝固，炎癥和創傷愈合等生理及病理過程中發揮重要作用，因此檢測凝血酶在醫學上具有重要意義。凝血酶（Thrombin）的濃度及活性是衡量凝血機制的重要指標，對揭示腫瘤的發生機制，或作為早期診斷，分子分型，療效和預后判斷具有重大意義。?

核酸適配體（Aptamer）是通過指數富集的配體系統進化技術（SELEX）經體外篩選得到的，能與響應的靶分子專一性緊密結合的一類單鏈DNA或RNA。與抗體相比，適配體靶分子范圍廣，親和力高，特異性強，篩選制備方便且純度高，批間重現性好，性質穩定，容易修飾功能團，因此在藥物篩選，臨床診斷和分析化學等領域得到了廣泛應用。目前建立的基于適配體檢測蛋白質的方法有比色法，熒光法，電化學法，壓電生物傳感法等。其中，熒光法具有靈敏度高，動態范圍寬，特性參數多等優點，具有很大的發展潛力。?

量子點是粒徑小于或接近于激子波爾半徑的半導體納米晶粒。它們處于分子與塊狀固體之間的中間狀態，通常由Ⅱ-Ⅵ族或Ⅲ-Ⅴ族元素組成。量子點的比表面積，表面原子數，表面能和表面張力都隨粒徑的下降而急劇增加。由于尺寸效應，表面效應以及宏觀量子隧道效應等，導致量子點的熱，磁，光，敏等特性和表面穩定性均優于相應的體材料。量子點的光學性質是目前科研工作者研究的一個熱點。?

量子點作為熒光探針廣泛地應用于生物醫學，分析科學，環境科學，食品科學等研究領域。其光學特性比傳統有機染料相比具有明顯的優越性：①量子點的熒光激發光譜寬，且連續分布。因此可以采用單一波長光源同時激發不同顏色的量子點；②可以通過改變量子點粒徑大小和組成材料來“調諧”其發射波長，將不同光譜區的量子點混合使用，可以使研究者通過多種顏色同時追蹤數種生物分子；③量子點的熒光光譜有較大的斯托克斯位移，熒光光譜窄而對稱，因此用不同光譜特征的量子點標記生物分子時，熒光光譜易于識別分析；④比?有機染料具有更高的光穩定性。在深入開發和研究量子點的熒光性質的同時，量子點的磷光性質也開始引起了科學家們的注意。?

磷光是一種長壽命的光，平均壽命達10^-4秒到數秒。磷光與熒光的發光機理不同，是分子中電子激發三線態T₁回到基態S₀而產生的輻射。由于T₁-S₀是禁阻的，其可能性僅為S₁-S₀過程可能性的百萬分之一。由于磷光壽命長，在發射光子以前，分子的碰撞運動會使T₁電子經無輻射弛豫返回基態，也就是所謂的磷光猝滅。為克服猝滅現象，最常見的方法就是使用深冷設備把分子固定為剛性體，這就是最初的低溫磷光。但是低溫磷光的限制條件是必須具有深冷設備，裝置價格昂貴且操作復雜。因此室溫磷光的研究引起了分析工作者的普遍重視。?

室溫磷光的檢測有很多的優點：①靈敏度高：磷光的靈敏度通常比一般的吸光光度法高三個數量級；②無需價格昂貴且使用麻煩的低溫冷卻裝置，免除了溶劑或溶液的除氧過程，相對低溫磷光法，大大降低了成本和簡化了操作步驟；③分析曲線線性范圍寬：通常達2-4個數量級；④選擇性好：這是因為磷光光譜的位置通常位于更長的波長，具有更大的斯托克斯位移，不會和激發光譜發生重疊，可以避免激發光的干擾，自吸收現象也有所減輕；⑤檢出限低：發光分析的檢出限一般決定于空白值的大小，因為磷光較少受雜散光及背景發光的干擾，即空白值較低；⑥易于實現連續操作和自動化。?