[發明專利]豬平均日增重相關基因Resistin的分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201310753012.7
• 申請日: 2013-12-30
• 公開（公告）號: CN103667279A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 李長春;鄒成;成宏;趙書紅;余梅;李新云
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 樊戎

1.一種豬平均日增重相關基因Resistin的分子標記，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

2.用于獲得權利要求1所述分子標記的引物對，其特征在于：所述引物對為：

正向引物：5′-CCCTCAGGTGAGTACAGAACT-3′；

反向引物：5′-AAGCCTGCAAGTGGGAATGAG-3′。

3.按權利要求1或2所述的分子標記的獲得方法，其特征在于：以具有Resistin基因的豬基因組DNA為模板，采用以下引物對：

正向引物：5′-CCCTCAGGTGAGTACAGAACT-3′；

反向引物：5′-AAGCCTGCAAGTGGGAATGAG-3′。

進行PCR擴增，其所獲得的分子標記為SEQ?ID?NO.2。

4.按照權利要求1所述的分子標記鑒定豬高的平均日增重性狀的方法，其特征在于：以待測豬的基因組DNA為模板，采用以下引物對：

正向引物：5′-CCCTCAGGTGAGTACAGAACT-3′；

反向引物：5′-AAGCCTGCAAGTGGGAATGAG-3′；

進行PCR擴增，其中，具有349bp條帶的豬，其具有Resistin基因，如SEQ?ID?NO.1。

5.權利要求1所述的分子標記在豬部分生長性狀及飼料轉化效率性狀相關分子標記輔助育種中的應用。

6.權利要求2所述的分子標記的引物對在豬部分生長性狀及飼料轉化效率性狀相關分子標記輔助育種中的應用。

7.一種鑒定含有Resistin基因的豬的方法，其特征在于，包括以下步驟是：

1）引物對：

正向引物：5′-CCCTCAGGTGAGTACAGAACT-3′；

反向引物：5′-AAGCCTGCAAGTGGGAATGAG-3′；

2）PCR擴增條件

PCR反應總體積10μl，其中待測豬基因組DNA模板1μl，正反向引物各0.2nmol/μl，PCRmix5μl，最后加入去離子水至總體積10μl；

3）PCR反應條件為：95℃預變性5min后，循環30次95℃變性30s、58℃退火30s、72℃延伸40s；最后72℃延伸5min；PCR產物經2％W/V瓊脂糖凝膠電泳檢測；

4）RFLP檢測

PCR產物酶切反應體積是10μl，其中PCR產物5μl，去離子水3.5μl，10×buffer1μl，限制性內切酶Alw26I為0.5μl(10U/μl)，

將樣品混勻后離心，37℃培養箱放置12h，用3.5%W/V瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切結果，記錄基因型，在紫外燈下拍照；

酶切產生三種基因型，TT基因型只有349bp一條帶，CC基因型有183bp和166bp兩條帶，雜合子TC基因型有349bp、183bp和166bp三條帶。