[發明專利]一種萘檢測生物細胞傳感器及其制備方法和使用方法在審
| 申請號： | 201310752396.0 | 申請日： | 2013-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN103695363A | 公開（公告）日： | 2014-04-02 |
| 發明（設計）人： | 孫寓姣;趙曉輝;丁愛中;陳程;張惠淳 | 申請（專利權）人： | 北京師范大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/63;G01N21/76;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京思創畢升專利事務所 11218 | 代理人： | 韋慶文 |
| 地址： | 100875 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 生物 細胞 傳感器 及其 制備 方法 使用方法 | ||
1.一種萘檢測生物細胞傳感器，其特征在于：
所述萘檢測生物細胞傳感器為基因重組細胞，所述基因重組細胞以水楊酸檢測光傳感細胞為宿主細胞，并且所述基因重組細胞的質粒由萘降解基因與載體質粒重組。
2.根據權利要求1所述的萘檢測生物細胞傳感器，其特征在于：
所述萘降解基因與所述載體質粒通過Gibson一步恒溫法實現DNA重組（One-step?isothermal?DNA?assembly）得到所述基因重組細胞的質粒。
3.根據權利要求1所述的萘檢測生物細胞傳感器，其特征在于：
所述萘降解基因為NahAD；
所述載體質粒為pWH1274；
所述水楊酸檢測光傳感細胞為不動桿菌ADPWH_lux（Acinetobacter?ADPWH_lux）。
4.一種如權利要求1～3所述的萘檢測生物細胞傳感器的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
1）宿主細胞水楊酸檢測光傳感細胞的培養；
2）獲取載體質粒和萘降解基因；
3）通過Gibson一步恒溫法將載體質粒和萘降解基因重組得到所述基因重組細胞的質粒；
4）將步驟3）得到的所述基因重組細胞的質粒轉入步驟1）得到的宿主細胞水楊酸檢測光傳感細胞。
5.根據權利要求4所述的萘檢測生物細胞傳感器的制備方法，其特征在于：
所述步驟2）包括以下步驟：
2-1）載體質粒的選擇與處理
其中，載體質粒的選擇是選擇帶有強啟動子質粒載體的菌株；
其中，對載體質粒進行處理，包括以下步驟：
2-1-1）提取載體質粒、2-1-2）對載體質粒DNA進行檢測、2-1-3）載體質粒聚合酶鏈式反應，即PCR（Polymerase?Chain?Reaction）、2-1-4）載體質粒的PCR產物的純化、2-1-5）PCR產物的檢測；
2-2）萘的降解基因的選擇和處理，包括以下步驟：
其中，對萘的降解基因的選擇是分析降解菌對PAHs污染物的降解機理，選擇能夠降解萘的菌株；
2-2-1）提取含萘的降解基因的質粒、2-2-2）萘降解基因的質粒DNA的檢測、2-2-3）所述含萘降解基因質粒的PCR反應、2-2-4）PCR產物的純化、2-2-5）PCR產物的檢測。
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