[發明專利]多組分核酸酶及其使用方法

在審

• 申請號: 201310751941.4
• 申請日: 2006-10-06
• 公開（公告）號: CN103789311A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 伊麗莎·莫卡尼;唐納德·約翰·伯基特;艾莉森·威爾彥·托德;崔姆·比奇·多恩
• 申請（專利權）人: 強生研究有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/68
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.產生多組分核酸酶(MNAzyme)并測定MNAzyme是否具有催化活性的方法，所述方法包括：

選擇分裂核酸酶催化核核苷酸序列的點，以在該點的相對側上形成第一和第二部分催化核部分；

在允許MNAzyme自組裝和MNAzyme潛在催化活性的條件下，接觸包括位于底物臂部分和感應臂部分之間的所述第一部分催化核部分的第一組分寡核苷酸，包括位于底物臂部分和感應臂部分之間的所述第二部分催化核部分的第二組分寡核苷酸，MNAzyme組裝易化子，以及潛在的能夠由MNAzyme催化修飾的第一底物，

其中所述組裝易化子與所述第一和第二組分寡核苷酸的所述感應臂部分雜交時，所述第一組分寡核苷酸和所述第二組分寡核苷酸自組裝形成MNAzyme，由此維持所述第一和第二寡核苷酸組分的鄰近使得它們各自的部分催化核部分締合形成所述MNAzyme的所述催化核，并且允許所述第一和第二組分寡核苷酸的底物臂部分各自與所述底物的通過所述催化核易化潛在修飾的底物雜交；以及

測定MNAzyme是否催化修飾底物，

其中底物的催化修飾指示MNAzyme是催化活性的，底物缺乏催化修飾指示MNAzyme無催化活性。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述選擇步驟選擇多個點，所述接觸步驟進行多個第一組分寡核苷酸和多個第二組分寡核苷酸，由此多個MNAzymes自組裝，所述MNAzymes的分裂點不同，以及所述測定步驟測定了多個MNAzymes中的哪一個催化修飾底物。

3.如權利要求1所述的方法，其還包括合成分別包括已測定活性的MNAzyme的催化部分核的第一和第二寡核苷酸組分。

4.如權利要求3所述的方法，其還包括形成包括合成的第一和第二寡核苷酸組分的試劑盒。

5.如權利要求1所述的方法，其中所述核酸酶催化核核苷酸序列來自DNAzyme或核酶。

6.如權利要求1所述的方法，其中所述核酸酶催化核核苷酸序列來自8:17DNAzyme或10:23DNAzyme。

7.如權利要求6所述的方法，其中所述核酸酶催化核核苷酸序列來自8:17DNAzyme，并且為NTNNNAGCNNNWCGKN。

8.如權利要求7所述的方法，其中所述點在核酸酶催化核核苷酸序列的核苷酸5,6,7,8,9,10或11之后。

9.如權利要求6所述的方法，其中所述核酸酶催化核核苷酸序列來自10:23DNAzyme，并且為NGGMTMGHNDNNNMGDN。

10.如權利要求1至9中任一項所述的方法，其中所述點在核酸酶催化核核苷酸序列的核苷酸5,6,7,8,9,10或11之后。

11.如權利要求1所述的方法，其還包括用不同的核苷酸取代核酸酶催化核核苷酸序列的一個或多個核苷酸。

12.如權利要求11所述的方法，其中所述不同的核苷酸是核糖核苷酸。

13.如權利要求11所述的方法，其中所述不同的核苷酸是脫氧核糖核苷酸。

14.如權利要求11所述的方法，其包括用不同的核苷酸取代核酸酶催化核核苷酸序列的兩個或多個核苷酸。

15.如權利要求1至9中任一項所述的方法，其中所述組裝易化子和/或底物包括任意一個或多個脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸以及多組分。

16.如權利要求1至9中任一項所述的方法，其中所述通過MNAzyme修飾底物是酶切底物。

17.如權利要求1至9中任一項所述的方法，其還包括提供能夠與所述感應臂的至少一個雜交的第二底物，其中所述通過MNAzyme修飾第一底物是與所述第二底物連接。

18.如權利要求1至9中任一項所述的方法，其中所述通過MNAzyme修飾底物選自：卟啉金屬化，形成碳碳鍵、酯鍵或酰胺鍵，或其任意組合。

19.如權利要求1至9中任一項所述的方法，其還包括測定對照MNAzyme的催化活性，用于比較所述MNAzyme的催化活性或其缺乏。