[發明專利]源于廣西巴馬長壽村的益生菌鼠李糖乳桿菌hsryfm1301及其應用

有效

• 申請號: 201310751034.X
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103710290A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 顧瑞霞;陳大衛;伍云;黃嘉棣;謝秉鏘;孫寧;鄒東昊;蔣欣榮
• 申請（專利權）人: 廣西皇氏甲天下乳業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23C9/123;C12R1/225
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種源于廣西巴馬長壽村的益生菌鼠李糖乳桿菌hsryfm1301及其應用。

技術背景

血清膽固醇水平過高是心血管疾病的主要原因，藥物是當前治療心血管疾病的主要方式，但是藥物治療的成本較高且有較大的副作用。臨床研究發現，降低血清中膽固醇水平能夠顯著降低心血管病的死亡率。大量動物和人體實驗表明，乳酸菌能夠降低血清中的膽固醇水平。乳酸菌代謝產生的活性物質能抑制腸道內致病菌的生長，調節腸道的微生態平衡；胃腸道中的細菌通過抗生素抗性基因的水平轉移，給臨床醫學帶來了嚴重難題；因此篩選分解膽固醇及甘油三酯，并具有抑菌能力及耐藥性較低的益生菌有著重要的意義。

發明內容

本發明目的在于提供具有分解膽固醇及甘油三酯能力的益生菌菌株及其應用。

本發明提供了一株鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus?rhamnosus）hsryfm1301，該菌具有分解膽固醇及甘油三酯能力，已于2013年12月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏號是CGMCC?NO.8545。

經試驗證明，該菌株具有分解膽固醇及甘油三酯的能力，并耐人工胃液及膽鹽，同時具有較強的抑菌能力，且耐藥性較低；通過生理生化、API試劑條和16S?rDNA序列比對分析，將該菌株鑒定為鼠李糖乳桿菌。

本發明還提供了鼠李糖乳桿菌hsryfm1301在制備具有分解膽固醇及甘油三酯能力的發酵乳、發酵乳飲料及活菌制劑中的應用。

本發明的鼠李糖乳桿菌hsryfm1301具有分解膽固醇及甘油三酯的能力，并耐人工胃液及膽鹽，同時具有較強的抑菌能力且耐藥性較低，將其用于制備發酵乳、發酵乳飲料及活菌制劑，具有很好的前景。

附圖說明

圖1為本發明菌株的形態圖。

圖2為本發明菌株API試劑條鑒定圖。

圖3為本發明菌株API鑒定結果。

圖4為本發明菌株16S?rDNA?PCR擴增產物電泳圖;泳道M：100+2+3Kb?DNA?maker；泳道1為：hsryfm130116S?rDNA擴增產物。

具體實施方式

本研究采用傳統涂布平板分離法從廣西巴馬長壽村采集的樣品中分離乳酸菌，通過體外試驗篩選出分解膽固醇及甘油三酯能力較強的乳酸菌菌株，然后通過模擬人體胃腸道環境篩選出耐酸耐膽鹽能力較強的菌株，并研究其抑菌性及耐藥性，通過綜合比較，獲得益生性能最為優異的益生菌菌株。

相關培養基及試劑配方

(1)MRS-THIO培養基：蛋白胨10.0g，三水醋酸鈉3.0g，牛肉膏8.0g，檸檬酸三銨2.0g，酵母浸膏4.0g，七水硫酸鎂0.2g，葡萄糖10.0g，一水硫酸錳0.04g，吐溫-801.0mL，磷酸氫二鉀2.0g，硫乙醇酸鈉2.0g，調pH至6.4，121℃滅菌15min，冷卻備用。

(3)膽固醇培養基：膽固醇0.10g、吐溫-801.0mL、蔗糖酯0.10g、冰乙酸5.0mL，冰浴超聲破碎備用。將上述制備的膽固醇膠束溶液加入到MRS液體培養基中，使培養基中膽固醇的終濃度為0.10mg/mL。并調pH至6.50±0.20，121℃滅菌15min，冷卻備用。

(4)甘油三酯培養基：將2%的聚乙烯醇水溶液與植物油按3:1的比例混合，用高速組織搗碎機處理后作為甘油三酯的來源。將上述制備的植物油乳化液加入到MRS液體培養基中，調pH至6.50±0.20，121℃滅菌15min，冷卻備用。

(5)人工胃液的配制：準確量取20.0mL1mol/L的HCl，用去離子水將pH分別調至2.0、3.0，加入NaCl使其質量分數達到0.2%，每100.0mL溶液中加入1.0g胃蛋白酶，充分溶解后，用0.22μm微孔濾膜在無菌操作臺中過濾除菌，于無菌試劑瓶中低溫保藏備用。

(6)硫酸鐵銨顯色劑：稱取4.46g硫酸鐵銨溶解于100.0mL85%磷酸中，取10.0mL溶液用濃硫酸定容至100.0mL，放入硅膠干燥皿中備用。

具體步驟：

1樣品采集

采集廣西巴馬長壽村中長壽人群及其家族人群樣品，加入1mL滅菌液體石蠟油密封后，迅速置于冰盒內，分離樣品中的乳酸菌。

2乳酸菌的分離