[發明專利]一種耐酸鋁的細菌菌株

有效

• 申請號: 201310751019.5
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN104017745B
• 公開（公告）日: 2017-02-01
• 發明（設計）人: 賀根和;林俊岳;吳吉春;張友海
• 申請（專利權）人: 井岡山大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明涉及微生物領域的細菌，具體地說是一種耐酸鋁的細菌菌株。?

背景技術：

鋁是生物正常生長的非必需元素，在微酸性和中性土壤中，鋁主要以三價氧化態和穩定的礦物質形式存在，表現出極低的生物有效性。但是，隨著土壤pH的降低，鋁可逐漸解離，以離子態釋放到土壤溶液中，成為有活性的單體形式(monomeric?Al)，對土壤生物存在非常大的毒害作用。近年來，隨著酸性沉降和化學肥料的大量使用，酸性紅壤中活性鋁濃度呈持續升高趨勢，已嚴重影響到農作物的生長。這種污染現狀，已引起了學術界廣泛的關注。?

如何降低土壤中鋁的毒害，提高農作物的產量、減少其對其他環境的危害，一直是紅壤區域綜合治理與生態恢復技術研究中的一個重要課題。傳統上，人們常用石灰和肥料等對土壤進行改良，旨在為作物生長創造適宜的土壤條件。施用石灰和肥料雖能減輕或防治表土的酸鋁所產生的作物生長障礙問題，但對于深底層土壤施用石灰或肥料既有困難也不經濟，而且這些措施需要投入大量的人力、物力和財力，且不能一勞永逸，難以取得良好的經濟效益和生態效益。?

近年來，隨著一些耐鋁微生物的發現，將馴化時間短、鋁離子吸附快、環境適應性強的微生物用于紅壤鋁毒的改良已日益受到人們的關注。?

發明內容：

本發明要解決的技術問題是，尋找分離出一種耐酸鋁的微生物細菌菌株。?

本發明的技術解決方案是，在紅壤土中分離出一種耐酸鋁的細菌菌株，該菌株屬于β變形桿菌亞門(β-proteobacteria)伯克氏菌屬(Burkholderia?sp.)，命名為Burkholderia?sp.SB1，并于2013年9月保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號為：CGMCC?No.8396。?

該菌株的生物學特性為：革蘭氏陰性，最適宜在pH值為5.0，溫度為37℃環境下生長；有較強的耐酸性；具有對氨芐青霉素、四環素以及硫鏈霉素的聯合抗性。該菌在生長初期，高濃度鋁會影響細菌的生長，但在其生長中后期表現出很強的耐鋁能力，明顯表現出對鋁的吸附特性。?

本發明所涉及的耐酸鋁的細菌菌株是通過以下方法分離篩選得到的：?

(1)在江西省吉安市境內采集的新鮮紅壤土樣本，在樣本內取5g鮮土加入10mL無菌水配成土壤溶液；取1mL土壤溶液于99mL滅菌GM液體培養基中，并在培養基中添加50μL?1mol/L無菌AlCl₃·6H₂O溶液、放置溫度37℃，振動頻率為260rpm/min振蕩培養箱中培養15h。?

(2)取步驟(1)中獲得的菌液1mL，加到裝有滅菌的99mL液體GM培養基的250mL錐形瓶中，培養基中外加100uL?1mol/L?AlCl₃·6H₂O溶液，放置溫度為37℃，振動頻率為260r/min振蕩培養箱中培養15h。?

(3)取步驟(2)中獲得的菌液5份，每份各1mL，分別加到裝有滅菌的99ml液體GM培養基的250mL錐形瓶中，每份培養基中外加鋁濃度分別為2mmol/L、4mmol/L、6mmol/L、8mmol/L、10mmol/L?AlCl₃·6H₂O溶液，并依次編號為1-5號樣本，放置溫度37℃，振動頻率為260rpm/min振蕩培養箱中培養15h。?

(4)對步驟(3)中的獲得的5份富集菌液，各取出1mL建立5份菌液樣本，并分別對這5份菌液進行梯度稀釋，稀釋梯度依次為原液、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4；并相應編號為1-5號樣本，對稀釋后的5份菌液，各取0.1mL所得的稀釋液分別涂布于含有與步驟(3)相對應的鋁濃度的GM固體培養基平板上，在溫度為37℃環境下培養2d。結果在涂布在GM固體培養基平板上的3-5號樣本沒有發現單菌落，而在1-2號樣本中分離篩選出本發明Burkholderia?sp.SB1。?

(5)用已滅菌的移液槍頭從2號樣本中挑取8個較大而且獨立的菌落，分別劃線于8個含鋁濃度為4mmol/L?AlCl₃·6H₂O的平板上，在溫度37℃環境下培養2d。將純化后的單菌于含4mmol/L?Al³⁺濃度培養基中擴大培養。獲得菌液部分保種于-80℃冰箱內，部分保存于4℃冰箱內用于后續實驗。?