[發明專利]一種優化的生產昆蟲病原線蟲的固體培養基

在審

• 申請號: 201310749476.0
• 申請日: 2013-12-30
• 公開（公告）號: CN104737986A
• 公開（公告）日: 2015-07-01
• 發明（設計）人: 阮維斌;陳文全;黎永立
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明涉及優化固體培養方法，提高昆蟲病原線蟲產量的方法。?

背景技術

據世界衛生組織和聯合國環境署報告，全世界每年有100多萬人農藥中毒，其中2萬人死亡。美國每年發生6.7萬起農藥中毒事故，在發展中國家情況更為嚴重。?

我國蔬菜農藥污染已經成為一個國民強烈關注的民生問題，尤其是我國韭菜上農藥檢出率和超標率都在30％以上，屢有農藥中毒事故發生，食品安全問題十分令人擔憂。眾所周知，長期高頻次使用化學農藥的大量使用會加速使昆蟲產生抗藥性，結果反而造成農戶只能過量使用或使用高毒性的農藥，從而陷入防治害蟲的惡性循環。?

昆蟲病原線蟲是昆蟲的天敵，其作為一種理想的生物殺蟲劑，具有以下優點：專性寄生，寄主范圍廣；對寄主昆蟲具有主動搜尋能力；能夠從寄主昆蟲的自然開口(如口器、氣門和肛門)、傷口或節間膜進入寄主昆蟲體內，并且能夠迅速殺死寄主昆蟲；能夠在人工培養基低成本大量培養；田間施用時可和多種化學農藥混合使用，對人畜、植物及有益生物及環境安全。由于昆蟲病原線蟲屬于環境友好型的生物天敵，歐美一些國家已經豁免注冊生產和生產銷售，并已經廣泛應用于地下害蟲甚至地上害蟲的防治之中。?

目前昆蟲病原線蟲的施用方法主要為將通過固體或液體培養出來的線蟲懸液噴灑到農作物或果樹上。固體基質培養法能夠生產昆蟲病原線蟲，八十年代初，Bedding和Wouts將海綿作填充劑分別加人雞內臟或其他動物內臟物質以及加大豆粉、酵母膏、玉米油等，實現了線蟲的固體基質培養，大大的提高了昆蟲病原線蟲產量，使線蟲制劑生產規模由小到大。同時，以海綿做為線蟲培養的充填劑，使線蟲的固體培養走向了工廠化。固體培養基法生產昆蟲病原線蟲，需要投資規模小，需要勞動力較多，屬于勞動密集型技術，比較適合我國當前的國情。但是，固體培養基法培養線蟲時，生產過程需要無菌，需要穩定的產量，進而才能降低成本，提高昆蟲病原線蟲的競爭力，在更大范圍和面積上替代化學農藥防治有害昆蟲。?

如何對現有的配方進行改進，提高固體法生產昆蟲病原線蟲，對完善和進一步推廣固體法生產昆蟲病原線蟲技術，具有非?，F實的研究和應用意義。?

發明內容

昆蟲病原線蟲固體培養基包括碳源、氮源等營養成分，主要包括豆粉、面粉、雞蛋黃粉、橄欖油、酵母提取物、海綿和水。本發明的目的是優化培養基，得到產量相對穩定的昆蟲病原線蟲固體培養基配方。通過優化的培養基我們得到了昆蟲病原線蟲產量22萬-32萬條線蟲/克培養基，而且該配方在培養期間，沒有染菌現象。本發明中優化的固體培養基，是一種能夠穩定生產昆蟲病原線蟲固體培養基。將降低培養過程中雜菌感染的風險，效果穩定。?

本發明利用優化的固體培養基生產昆蟲病原線蟲。本發明所述的線蟲為昆蟲病原線蟲。?

本發明中優化的生產昆蟲病原線蟲的固體培養為：?

優化的固體培養基配方：每12克培養基中包括豆粉(1.79克)，面粉(0.31克)，雞蛋黃?粉(0.1克)，橄欖油(0.3克)、酵母提取物(0.2克)，海綿(1.0克)和水(8.3克)。?

實施例1.12克優化的昆蟲病原線蟲固體培養基?

用豆粉(1.79克)，面粉(0.31克)，雞蛋黃粉(01克)，橄欖油(0.3克)、酵母提取物(0.2克)，海綿(1.0克)和水(8.3克)混合配置得到12克克體培養基。?

實施例2.36克優化的昆蟲病原線蟲固體培養基?

用豆粉(5.37克)，面粉(0.93克)，雞蛋黃粉(0.3克)，橄欖油(0.9克)、酵母提取物(0.6克)，海綿(3.0克)和水(24.9克)混合配置得到了36克固體培養基。?

實施例3.應用優化的固體培養基增加昆蟲病原線蟲的產量?

按照實施例1所述，配置12克優化的固體培養基，并依照傳統無菌培養步驟培養昆蟲病原線蟲，增產效果明顯，產量達30萬條/克培養基，比對照增加了37％(表1)。對照培養基采用文獻報導方法配置(王麗芳等2010)。?

表1、優化的固體培養基配方增加昆蟲病原線蟲產量的效果(單位：條/克培養基)?

按照實施例2所述，配置36克優化的固體培養基，依照傳統無菌培養步驟培養昆蟲病原線蟲，優化培養基的產量約為23.7萬條/克培養基，比對照(12.7萬條/克培養基)增加了46％。對照組出現雜菌，而優化培養基組產量穩定，具有很好的增產效果(表2)。對照培養基采用文獻報導方法配置(王麗芳等2010)?？梢妰灮呐囵B基能夠穩定的生產昆蟲病原線蟲，有利于利用固體培養基法的工業化生產昆蟲病原線蟲。?