[發明專利]28-O-β-D-葡萄糖基化遠志皂苷、其制備方法及用途

在審

• 申請號: 201310748565.3
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103739655A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 杜晨暉;張劍;余伯陽
• 申請（專利權）人: 杜晨暉
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00;C12P33/00;A61K31/7024;A61P29/00
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技術領域

?本發明涉及生物藥物領域，具體涉及28-O-β-D-葡萄糖基化遠志皂苷及其制備方法，本發明還公開了其抗炎方面的用途。

背景技術

炎癥是人類疾病中最常見的一種病理過程，與大多數疾病相關。抗炎藥物是臨床上僅次于抗感染藥物的第二大類藥物，目前臨床上應用較多的抗炎藥物主要是非甾體抗炎藥和腎上腺皮質激素類藥物，但是這些藥物作用是多靶點，多途徑的，使用的劑量和療程也各有不同而且各種機制之間也存在復雜的網絡關系，長期使用會帶來很多不良反應。隨著對中藥的不斷地開發和認識以及多年的臨床和實驗證實，很多中藥具有良好的抗炎作用，且毒副作用小而且資源豐富，因此中藥單體的開發和結構改造以及對其藥理作用機制的研究已經成為當今世界上新藥開發的熱點。五環三萜類化合物廣泛分布于各種植物中，具有廣泛的生物活性，研究顯示在抗炎方面具有顯著的活性。如一些遠志皂苷具有明顯的抗炎作用，但是天然種類多，含量少，其苷元獲得相對簡單，而活性相對要差，水溶性差，影響了其藥效的發揮。為了增加水溶性，同時保持其活性，對其苷元進行了結構修飾，化學合成了大量的衍生物，其中不乏有活性好的化合物發現。但有關美遠志皂苷元的微生物定向糖基化修飾少見報道。

微生物轉化是利用微生物產生的特異酶對外源性化合物進行結構修飾的特定生化反應。微生物轉化具有高度的立體結構選擇性，能專一地催化特定的反應、無需繁瑣的保護與脫保護操作，具有高效、環保的優點，是天然活性化合物進行結構修飾的一種有效方法。若在含有羧基的齊墩果烷型五環三萜類苷元中引入糖基可以在一定程度上解決生物利用度差的問題，同時保持其活性。

發明內容

本發明公開了結構式I的化合物：

命名為28-O-β-D-葡萄糖基化遠志皂苷。本發明同時也包括結構式I的化合物的溶劑化物。其¹³C-NMR數據為:?δ?(ppm)?C(1)?45.0，C(2)?71.8，C(3)?76.1，C(4)?54.0，C(5)?52.2，C(6)?20.4，C(7)?38.7，C(8)?39.8，C(9)?52.7，C(10)?36.9，C(11)?21.5，C(12)?45.5，C(13)?130.3，C(14)?144.1，C(15)?21.7，C(16)?22.0，C(17)?47.3，C(18)?39.3，C(19)?42.4，C(20)?30.9，C(21)?33.6，C(22)?30.9，C(23)?180.8，C(24)?19.5，C(25)?18.1，C(26)?13.3，C(27)?48.9，C(28)?176.2，C(29)?32.9，C(30)?24.7，與美遠志皂苷元¹³C-NMR數據相比較，可以確定其母核為美遠志皂苷元，通過化學位移值的變化可確定糖是連在C₂₈位上。另外還有6個葡萄糖碳信號，分別為GLC(1)?95.1，GLC(2)?74.2，GLC(3)?78.8，GLC(4)?71.8，GLC(5)?79.1，GLC(6)?62.7。

藥理試驗證明，本發明的式I化合物具有優異的抗炎活性。

????本發明的式I化合物優選用生物轉化方法以美遠志皂苷元為底物進行轉化制備，方法如下：

為了尋找適宜轉化美遠志皂苷元成28-O-β-D-葡萄糖基化遠志皂苷的菌種，本發明共篩選了多個菌種，結果發現，保藏號為NRRL1086菌種對美遠志皂苷元具有較強的轉化能力（見表2）。

篩選所用液體培養基(PDA)：200克新鮮去皮馬鈴薯加沸水500mL煮15min后過濾，濾液加葡萄糖20g、KH₂PO₄?3.0g、MgSO₄?0.75g、Vb₁?10.0mg，加蒸餾水定容至1.0L，加NaOH或HCl調pH值至6.0，150mL三角燒瓶每瓶分裝30mL液體培養基，121℃、0.15MPa滅菌20min。

篩選菌種時，保存菌種所用斜面培養基是在上述液體培養基加入1.5%的瓊脂，15mL具塞試管每管5mL，121℃、0.15MPa滅菌20min冷卻后制成。