[發明專利]基于LuxS缺陷的變異鏈球菌AMC代謝恢復株無效
| 申請號： | 201310748046.7 | 申請日： | 2013-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN103865861A | 公開（公告）日： | 2014-06-18 |
| 發明（設計）人： | 黃正蔚;王玉霞 | 申請（專利權）人： | 上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/74;C12R1/46 |
| 代理公司： | 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218 | 代理人： | 施春花;翟羽 |
| 地址： | 200011 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 luxs 缺陷 變異 鏈球菌 amc 代謝 恢復 | ||
【權利要求書】：
1.一種基于LuxS缺陷的變異鏈球菌AMC代謝恢復株，其特征在于，所述AMC代謝恢復株為Streptococcus?mutans?KO-S?UA159：：△luxS,?pIB-sahH，保藏編號為CCTCC?M?2013699。
2.權利要求1所述一種基于LuxS缺陷的變異鏈球菌AMC代謝恢復株的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）利用大腸桿菌-變異鏈球菌穿梭表達質粒pIB169，通過酶切、連接，將體外PCR擴增出的sahH和luxS基因片段連接到載體上，構建出大腸桿菌-變異鏈球菌SahH蛋白的穿梭表達質粒及作為陽性表達對照的LuxS蛋白表達質粒；
（2）質粒經序列鑒定后首先轉化入大腸桿菌，通過western?blot檢測SahH和LuxS蛋白表達，驗證載體和目的基因的表達能力；
（3）利用CSP誘導變異鏈球菌感受態形成，將質粒轉化入變異鏈球菌，通過質粒抽提雙酶切驗證質粒轉化成功；
（4）通過RNA抽提、反轉錄及PCR驗證目的基因的成功轉錄；
（5）利用AI-2報告菌株哈維氏弧菌BB170對AI-2的分泌進行檢測，以陽性表達對照的AI-2分泌陽性為證據，驗證SahH蛋白在變異鏈球菌中的成功表達。
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